AOPI Dual-fluorescen counting is het testtype dat wordt gebruikt voor het detecteren van celconcentratie en levensvatbaarheid.De oplossing is een combinatie van acridine-oranje (de groen-fluorescerende nucleïnezuurkleuring) en propidiumjodide (de rood-fluorescerende nucleïnezuurkleuring).Propidiumjodide (PI) is een membraanuitsluitingskleurstof die alleen cellen binnendringt met aangetaste membranen, terwijl acridine-sinaasappel alle cellen in een populatie kan binnendringen.Wanneer beide kleurstoffen in de kern aanwezig zijn, veroorzaakt propidiumjodide een vermindering van de acridine-oranje fluorescentie door fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET).Als resultaat kleuren kernhoudende cellen met intacte membranen fluorescerend groen en worden ze als levend geteld, terwijl kernhoudende cellen met aangetaste membranen alleen fluorescerend rood kleuren en als dood worden geteld bij gebruik van het Countstar® FL-systeem.Materialen zonder kern, zoals rode bloedcellen, bloedplaatjes en afval, fluoresceren niet en worden door de Countstar® FL-software genegeerd.
Proces van stamceltherapie
Figuur 4 Monitoring van de levensvatbaarheid en celtelling van mesenchymale stamcellen (MSC's) voor gebruik in celtherapieën.
Bepaal de levensvatbaarheid van MSC door middel van AO/PI en Trypan Blue-assay
Figuur 2. A. Afbeelding van MSC gekleurd door AO/PI en Trypan Blue;2. Vergelijking van AO/PI en Trypan blauw resultaat voor en na transport.
De celbrekingsindex verandert, Trypan Blue-kleuring was niet zo duidelijk, het is moeilijk om de levensvatbaarheid na transport te bepalen.Terwijl tweekleurige fluorescentie kleuring van levende en dode kernhoudende cellen mogelijk maakt, genereert het nauwkeurige levensvatbaarheidsresultaten, zelfs in de aanwezigheid van puin, bloedplaatjes en rode bloedcellen.
