AOPI Dual-fluoresces-telling er analysetypen som brukes for å oppdage cellekonsentrasjon og levedyktighet.Løsningen er en kombinasjon av akridinoransje (den grønnfluorescerende nukleinsyreflekken) og propidiumjodid (den rødfluorescerende nukleinsyreflekken).Propidiumjodid (PI) er et membraneksklusjonsfargestoff som bare kommer inn i celler med kompromitterte membraner, mens akridinoransje er i stand til å penetrere alle celler i en populasjon.Når begge fargestoffene er tilstede i kjernen, forårsaker propidiumjodid en reduksjon i akridinoransjefluorescens ved fluorescensresonansenergioverføring (FRET).Som et resultat av dette farges kjerneholdige celler med intakte membraner fluorescerende grønt og regnes som levende, mens kjerneholdige celler med kompromitterte membraner bare farges fluorescerende rødt og regnes som døde ved bruk av Countstar® FL-systemet.Ikke-kjerneholdig materiale som røde blodceller, blodplater og rusk fluorescerer ikke og ignoreres av Countstar® FL-programvaren.
Prosessen med stamcelleterapi
Figur 4 Overvåking av levedyktighet og celletall av mesenkymale stamceller (MSCs) for bruk i celleterapier.
Bestem MSC-levedyktighet ved AO/PI og Trypan Blue-analyse
Figur 2. A. Bilde av MSC farget med AO/PI og Trypan Blue;2. Sammenligning av AO/PI og Trypanblått resultat før og etter transport.
Cellebrytningsindeksen endres, Trypan Blue-farging var ikke så tydelig, det er vanskelig å bestemme levedyktigheten etter transport.Mens tofarget fluorescens tillater farging av levende og døde kjerneholdige celler, genererer nøyaktige levedyktighetsresultater selv i nærvær av rusk, blodplater og røde blodceller.
