Eksperimentell protokoll
Cytotoksisitet % beregnes ved ligningen nedenfor.
Cytotoksisitet % = (Levende tellinger av kontroll – Levende tellinger av behandlede) / Levende tellinger av kontroll × 100
Ved å merke måltumorcellene med ikke-toksisk, ikke-radioaktivt kalcein AM eller transfektere med GFP, kan vi overvåke drepingen av tumorcellene av CAR-T-celler.Mens levende målkreftceller vil bli merket med en grønn calcein AM eller GFP, kan ikke de døde cellene beholde det grønne fargestoffet.Hoechst 33342 brukes til å farge alle celler (både T-celler og tumorceller), alternativt kan måltumorceller farges med membranbundet kalcein AM, PI brukes til å farge de døde cellene (både T-celler og tumorceller).Denne fargestrategien gjør det mulig å skille mellom forskjellige celler.
E: T-forholdsavhengig cytotoksisitet av K562
Eksemplet Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescerende bilder er K562-målcellene ved t = 3 timer
De resulterende fluorescerende bildene viste økning i Hoechst+CFSE+PI+-målceller ettersom E:T-forholdet økte
