ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ % ਦੀ ਗਣਨਾ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਮੀਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ % = (ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੀ ਲਾਈਵ ਗਿਣਤੀ - ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਲਾਈਵ ਸੰਖਿਆਵਾਂ) / ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੀ ਲਾਈਵ ਗਿਣਤੀ × 100
ਟੀਚੇ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਗੈਰ-ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ, ਗੈਰ-ਰੇਡੀਓਐਕਟਿਵ ਕੈਲਸੀਨ AM ਜਾਂ GFP ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟ ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕਰਕੇ, ਅਸੀਂ CAR-T ਸੈੱਲਾਂ ਦੁਆਰਾ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਹੱਤਿਆ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।ਜਦੋਂ ਕਿ ਲਾਈਵ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਰੇ ਕੈਲਸੀਨ AM ਜਾਂ GFP ਦੁਆਰਾ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇਗਾ, ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲ ਹਰੇ ਰੰਗ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਨਹੀਂ ਰੱਖ ਸਕਦੇ ਹਨ।Hoechst 33342 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਾਰੇ ਸੈੱਲਾਂ (ਟੀ ਸੈੱਲ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲ ਦੋਵੇਂ) ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਵਿਕਲਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਟੀਚੇ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਝਿੱਲੀ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹੇ ਕੈਲਸੀਨ AM ਨਾਲ ਦਾਗ਼ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, PI ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ (ਟੀ ਸੈੱਲ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲ ਦੋਵੇਂ) ਦੇ ਦਾਗ਼ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਸਟੈਨਿੰਗ ਰਣਨੀਤੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਿਤਕਰੇ ਲਈ ਸਹਾਇਕ ਹੈ।
E: K562 ਦਾ ਟੀ ਅਨੁਪਾਤ ਨਿਰਭਰ ਸਾਇਟੋਟੌਕਸਿਟੀ
ਉਦਾਹਰਨ Hoechst 33342, CFSE, PI ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਚਿੱਤਰ, T = 3 ਘੰਟੇ 'ਤੇ K562 ਟਾਰਗੇਟ ਸੈੱਲ ਹਨ।
ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੇ Hoechst+CFSE+PI+ ਟਾਰਗੇਟ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ E: T ਅਨੁਪਾਤ ਵਧਿਆ ਹੈ।
