System Countstar łączy cytometr obrazu i licznik komórek w jednym urządzeniu laboratoryjnym.Ten oparty na aplikacjach, kompaktowy i zautomatyzowany system obrazowania komórek zapewnia kompleksowe rozwiązanie do badań nad komórkami rakowymi, w tym liczenia komórek, żywotności (AO/PI, błękit trypanowy), apoptozy (załącznik V-FITC/PI), komórek cykl (PI) i transfekcja GFP/RFP.
Abstrakcyjny
Rak jest jedną z głównych przyczyn zgonów na świecie, a rozwój nowych metod leczenia raka ma ogromne znaczenie.Komórka rakowa jest podstawowym obiektem badań nad rakiem, z komórki rakowej należy uzyskać różne informacje.Ten obszar badań wymaga szybkiej, niezawodnej, prostej i szczegółowej analizy komórek.System Countstar zapewnia prostą platformę rozwiązań do analizy komórek nowotworowych.
Badanie apoptozy komórek rakowych przez Countstar Rigel
Testy apoptozy są rutynowo stosowane w wielu laboratoriach do różnych celów, od oceny zdrowia kultur komórkowych do oceny toksyczności panelu związków.
Test apoptozy jest typem stosowanym do określania procentu apoptozy komórek metodą barwienia aneksyną V-FITC/PI.Aneksyna V wiąże się z fosfatydyloseryną (PS) z wczesną apoptozą lub martwicą komórki.PI wnika tylko do komórek martwiczych/bardzo późnego stadium apoptozy.(Rysunek 1)
Odp.: wczesna apoptoza aneksyna V (+), PI (-)
B: Późna apoptoza Aneksyna V (+), PI (+)
Rysunek 1: Powiększone szczegóły zdjęć Countstar Rigel (5-krotne powiększenie) komórek 293 poddanych działaniu aneksyny V FITC i PI
Analiza cyklu komórkowego komórek rakowych
Cykl komórkowy lub cykl podziału komórki to seria zdarzeń zachodzących w komórce, prowadzących do jej podziału i duplikacji jej DNA (replikacji DNA) w celu wytworzenia dwóch komórek potomnych.W komórkach z jądrem, podobnie jak u eukariontów, cykl komórkowy dzieli się również na trzy okresy: interfazę, fazę mitotyczną (M) i cytokinezę.Jodek propidyny (PI) to barwnik do jądra komórkowego, który jest często używany do pomiaru cyklu komórkowego.Ponieważ barwnik nie może wejść do żywych komórek, komórki są utrwalane etanolem przed barwieniem.Wszystkie komórki są następnie barwione.Komórki przygotowujące się do podziału będą zawierać coraz większe ilości DNA i wykazywać proporcjonalnie zwiększoną fluorescencję.Różnice w intensywności fluorescencji służą do określenia procentu komórek w każdej fazie cyklu komórkowego.Countstar może przechwycić obraz, a wyniki zostaną wyświetlone w oprogramowaniu FCS express.(Rysunek 2)
Figura 2: MCF-7 (A) i 293T (B) wybarwiono zestawem do wykrywania cyklu komórkowego z PI, wyniki zostały określone przez Countstar Rigel i przeanalizowane przez ekspresję FCS.
Oznaczanie żywotności i transfekcji GFP w komórce
Podczas bioprocesu GFP jest często używany do fuzji z rekombinowanym białkiem jako wskaźnikiem.Określ, czy fluorescencja GFP może odzwierciedlać ekspresję białka docelowego.Countstar Rigel oferuje szybki i prosty test do testowania transfekcji GFP oraz żywotności.Komórki barwiono jodkiem propidyny (PI) i Hoechst 33342 w celu określenia populacji martwych komórek i całkowitej populacji komórek.Countstar Rigel oferuje szybką, ilościową metodę jednoczesnej oceny wydajności ekspresji GFP i żywotności.(Rysunek 4)
Figura 4: Komórki są lokalizowane przy użyciu Hoechst 33342 (niebieski) i można łatwo określić procent komórek wyrażających GFP (zielony).Nieżywe komórki barwiono jodkiem propidyny (PI; czerwony).
Żywotność i liczba komórek
Zliczanie dwóch fluorescencji AO/PI jest typem testu używanym do wykrywania stężenia i żywotności komórek.Dzieli się na liczenie linii komórkowych i liczenie komórek pierwotnych według różnych typów komórek.Roztwór zawiera kombinację zielonofluorescencyjnego barwienia kwasu nukleinowego, oranżu akrydyny i czerwonofluorescencyjnego barwienia kwasu nukleinowego, jodku propidyny.Jodek propidyny jest barwnikiem wykluczającym błonę, który przenika tylko do komórek z uszkodzonymi błonami, podczas gdy oranż akrydyny przenika wszystkie komórki w populacji.Gdy oba barwniki są obecne w jądrze, jodek propidyny powoduje zmniejszenie fluorescencji oranżu akrydyny poprzez transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET).W rezultacie komórki jądrzaste z nienaruszonymi błonami barwią się na zielono fluorescencyjnie i są liczone jako żywe, podczas gdy komórki jądrzaste z uszkodzonymi błonami barwią tylko na czerwono fluorescencyjnie i są liczone jako martwe przy użyciu systemu Countstar Rigel.Materiały niejądrzaste, takie jak czerwone krwinki, płytki krwi i szczątki, nie fluoryzują i są ignorowane przez oprogramowanie Countstar Rigel.(Rysunek 5)
Rycina 5: Countstar zoptymalizował metodę barwienia z podwójną fluorescencją w celu prostego, dokładnego oznaczania stężenia i żywotności PBMC.Próbki wybarwione AO/PI można analizować za pomocą licznika Counstar Rigel
