Zliczanie AOPI Dual-fluoresces jest typem testu używanym do wykrywania stężenia i żywotności komórek.Roztwór jest połączeniem oranżu akrydyny (barwnik kwasu nukleinowego o zielonej fluorescencji) i jodku propidyny (barwnik kwasu nukleinowego o czerwonej fluorescencji).Jodek propidyny (PI) jest barwnikiem wykluczającym błonę, który przenika tylko do komórek z uszkodzonymi błonami, podczas gdy oranż akrydyny jest w stanie przeniknąć do wszystkich komórek w populacji.Gdy oba barwniki są obecne w jądrze, jodek propidyny powoduje zmniejszenie fluorescencji oranżu akrydyny poprzez transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET).W rezultacie komórki jądrzaste z nienaruszonymi błonami barwią się na zielono fluorescencyjnie i są liczone jako żywe, podczas gdy komórki jądrzaste z uszkodzonymi błonami barwią tylko na czerwono fluorescencyjnie i są liczone jako martwe przy użyciu systemu Countstar® FL.Materiały niejądrzaste, takie jak czerwone krwinki, płytki krwi i szczątki, nie ulegają fluorescencji i są ignorowane przez oprogramowanie Countstar® FL.
Proces terapii komórkami macierzystymi
Rycina 4 Monitorowanie żywotności i liczby komórek mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) do stosowania w terapiach komórkowych.
Określ żywotność MSC za pomocą testu AO/PI i Trypan Blue
Rycina 2. A. Obraz MSC wybarwiony AO/PI i błękitem trypanowym;2. Porównanie wyników AO/PI i błękitu Trypanu przed i po transporcie.
Zmiany współczynnika refrakcji komórek, barwienie błękitem trypanu nie było tak oczywiste, trudno jest określić żywotność po transporcie.Podczas gdy dwukolorowa fluorescencja umożliwia barwienie żywych i martwych komórek jądrzastych, generując dokładne wyniki żywotności nawet w obecności resztek, płytek krwi i czerwonych krwinek.
