په ټوله وینه کې د لیوکوسایټونو مستقیم تحلیل پرته له لیز کولو څخه

په ټوله وینه کې د لیوکوسایټس تحلیل کول په کلینیکي لابراتوار یا د وینې بانک کې یو معمول ارزونه ده.د لیوکوسایټس غلظت او وړتیا د وینې ذخیره کولو کیفیت کنټرول په توګه حیاتي شاخص دی.د لیوکوسایټ سربیره، په ټوله وینه کې لوی شمیر پلیټلیټونه، د وینې سره حجرې، یا د حجرو ملنډې شاملې دي، چې دا ناشونې کوي چې ټوله وینه مستقیم د مایکروسکوپ یا روښانه ساحې حجرو کاونټر لاندې تحلیل کړي.د سپینې وینې حجرو شمیرلو لپاره دودیز میتودونه د RBC lysis پروسه شامله ده، کوم چې وخت نیسي.

د AOPI دوه ګونی فلوروسیس شمیرنه د ارزونې ډول دی چې د حجرو غلظت او وړتیا معلومولو لپاره کارول کیږي.محلول د اکریډین نارنج (د شین فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ) او پروپیډیم آیوډیډ (د سور فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ) ترکیب دی.پروپیډیم آیوډیډ (PI) د غشا جلا کولو رنګ دی چې یوازې د جوړ شوي جھلی سره حجرو ته ننوځي، پداسې حال کې چې اکریډین نارنجي د دې توان لري چې په نفوس کې ټولو حجرو ته ننوځي.کله چې دواړه رنګونه په نیوکلیوس کې شتون ولري، پروپیډیم آیوډیډ د فلوروسینس ریزونانس انرژی لیږد (FRET) په واسطه د اکریډین نارنجي فلوروسینس د کمښت لامل کیږي.د پایلې په توګه، نیوکلیټ شوي حجرې چې د پاتې غشا سره د فلوروسینټ شنه رنګ لري او ژوندی شمیرل کیږي، پداسې حال کې چې د جوړ شوي غشا سره نیوکلیټ شوي حجرې یوازې فلوروسینټ سور رنګ کوي او د Countstar® Rigel سیسټم کارولو په وخت کې مړ شوي شمیرل کیږي.

Countstar Rigel د ډیری پیچلي حجرو نفوس ځانګړتیا ارزونو لپاره یو مثالی حل دی، په ټوله وینه کې د سپینې وینې حجرو په چټکتیا سره تحلیل کولو توان لري.

تجربوي کړنلاره:

1. د وینې نمونه 20 µl واخلئ او نمونه په 180 µl PBS کې ضعیف کړئ.
2. په 12µl نمونه کې 12µl AO/PI محلول اضافه کړئ، په نرمۍ سره د پایپټ سره مخلوط کړئ؛
3. 20µl مخلوط د چیمبر سلایډ کې رسم کړئ؛
4. حجرو ته اجازه ورکړئ چې شاوخوا 1 دقیقې لپاره په چیمبر کې ځای پرځای شي؛
5. سلایډ د Countstar FL وسیلې کې حشره کړئ؛
6. د "AO/PI وړتیا" ارزونه غوره کړئ، بیا د دې نمونې لپاره نمونه ID داخل کړئ.
7. د تحلیل تناسب غوره کړئ، د حجرو ډول، د ازموینې پیل کولو لپاره 'چلولو' کلیک وکړئ.

احتیاط: AO او PI یو احتمالي سرطان دی.دا سپارښتنه کیږي چې چلونکي شخصي محافظتي تجهیزات (PPE) واغوندي ترڅو د پوستکي او سترګو سره مستقیم تماس څخه مخنیوی وشي.

پایله:

1. د ټولې وینې روښانه ساحه انځور

د ټولې وینې په روښانه ساحه کې، WBC د وینې د سرو حجرو په منځ کې نه لیدل کیږي.(شکل 1)

شکل 1 د ټولې وینې روښانه ساحې انځور.

2. د ټولې وینې فلوروسینس انځور

AO او PI رنګ دواړه د حجرو په هسته کې د DNA داغونه دي.له همدې امله، پلیټلیټونه، د وینې سره حجرې، یا د حجرو کثافات نشي کولی د لیوکوسایټ غلظت او د وړتیا پایلې اغیزه وکړي.ژوندی لیوکوسایټس (شنه) او مړ لیوکوسایټ (سور) په اسانۍ سره د فلوروسینس عکسونو کې لیدل کیږي.(انځور 2)

شکل 2 د ټولې وینې فلوروسینس عکسونه.(الف).د AO چینل انځور؛(ب) د PI چینل انځور؛(C) د AO او PI چینل انځورونه یوځای کړئ.

3. د لیوکوسایټونو غلظت او وړتیا

د Countstar FL سافټویر په اوتومات ډول د دریو چیمبر برخو حجرې حسابوي او د ټول WBC حجرو شمیر (1202) اوسط ارزښت محاسبه کوي ، غلظت (1.83 x 106 حجرې / ml) ، او٪ وړتیا (82.04٪).د وینې ټول عکسونه او ډیټا په اسانۍ سره د اضافي تحلیل یا ډیټا آرشیف کولو لپاره د PDF ، عکس یا Excel په توګه صادر کیدی شي.

شکل 3 د کاونسټار ریګل سافټویر سکرین شاټ