O sistema Countstar combina o citômetro de imagem e o contador de células em um único instrumento de bancada.Este sistema de geração de imagens de células compacto, automatizado e orientado a aplicativos fornece uma solução completa para pesquisa de células cancerígenas, incluindo contagem de células, viabilidade (AO/PI, azul de tripano), apoptose (Anexina V-FITC/PI), células ciclo (PI) e transfecção GFP/RFP.
Abstrato
O câncer é uma das principais causas de morte em todo o mundo, e o desenvolvimento de novos métodos de tratamento do câncer é de grande importância.A célula cancerosa é o objeto básico de pesquisa do câncer, várias informações precisam ser avaliadas a partir da célula cancerosa.Esta área de pesquisa necessita de análises celulares rápidas, confiáveis, simples e detalhadas.O sistema Countstar fornece uma plataforma de solução simples para análise de células cancerígenas.
Estudo de Apoptose de Células de Câncer por Countstar Rigel
Ensaios de apoptose são usados rotineiramente em muitos laboratórios para diversos propósitos, desde avaliar a saúde de culturas de células até avaliar a toxicidade de um painel de compostos.
O ensaio de apoptose é um tipo usado para determinar a porcentagem de apoptose das células pelo método de coloração de Anexina V-FITC/PI.A anexina V liga-se à fosfatidilserina (PS) com células de apoptose precoce ou células de necrose.O PI entra apenas nas células apoptóticas necróticas/muito tardias.(Figura 1)
A： Apoptose precoce Anexina V (+), PI (-)
B：Apoptose tardia Anexina V (+), PI (+)
Figura 1: Detalhes ampliados das imagens de Countstar Rigel (ampliação de 5 x) de 293 células, tratadas com Anexina V FITC e PI
Análise do ciclo celular da célula cancerosa
O ciclo celular ou ciclo de divisão celular é a série de eventos que ocorrem em uma célula levando à sua divisão e duplicação de seu DNA (replicação de DNA) para produzir duas células filhas.Nas células com núcleo, como nos eucariotos, o ciclo celular também é dividido em três períodos: interfase, fase mitótica (M) e citocinese.O iodeto de propídio (PI) é um corante de coloração nuclear que é frequentemente usado para medir o ciclo celular.Como o corante não pode entrar nas células vivas, as células são fixadas com etanol antes da coloração.Todas as células são então coradas.As células que se preparam para a divisão conterão quantidades crescentes de DNA e exibirão fluorescência proporcionalmente aumentada.As diferenças na intensidade de fluorescência são usadas para determinar a porcentagem de células em cada fase do ciclo celular.O Countstar pode capturar a imagem e os resultados serão exibidos no software FCS express.(Figura 2)
Figura 2: MCF-7 (A) e 293T (B) foram corados com kit de detecção de ciclo celular com PI, os resultados foram determinados por Countstar Rigel e analisados por FCS express.
Viabilidade e determinação de transfecção de GFP na célula
Durante o bioprocesso, a GFP é frequentemente usada para se fundir com a proteína recombinante como indicador.Determine a GFP fluorescente pode refletir a expressão da proteína alvo.Countstar Rigel oferece um ensaio rápido e simples para testar a transfecção de GFP, bem como a viabilidade.As células foram coradas com iodeto de propídio (PI) e Hoechst 33342 para definir a população de células mortas e a população total de células.Countstar Rigel oferece um método rápido e quantitativo para avaliar a eficiência e viabilidade da expressão GFP ao mesmo tempo.(Figura 4)
Figura 4: As células são localizadas usando Hoechst 33342 (azul) e a porcentagem de células expressando GFP (verde) pode ser facilmente determinada.As células não viáveis são coradas com iodeto de propídio (PI; vermelho).
Viabilidade e contagem de células
A contagem de fluorescência dupla AO/PI é o tipo de ensaio usado para detectar a concentração e viabilidade das células.É dividido em contagem de linha de células e contagem de células primárias de acordo com o tipo de célula diferente.A solução contém uma combinação da coloração de ácido nucleico verde-fluorescente, laranja de acridina, e a coloração de ácido nucleico vermelho-fluorescente, iodeto de propídio.O iodeto de propídio é um corante de exclusão de membrana que entra apenas nas células com membranas comprometidas, enquanto o laranja de acridina penetra em todas as células de uma população.Quando ambos os corantes estão presentes no núcleo, o iodeto de propídio causa uma redução na fluorescência laranja de acridina por transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET).Como resultado, as células nucleadas com membranas intactas coram em verde fluorescente e são contadas como vivas, enquanto as células nucleadas com membranas comprometidas apenas coram em vermelho fluorescente e são contadas como mortas ao usar o sistema Countstar Rigel.Materiais não nucleados, como glóbulos vermelhos, plaquetas e detritos, não fluorescem e são ignorados pelo software Countstar Rigel.(Figura 5)
Figura 5: O Countstar otimizou um método de coloração de fluorescência dupla para determinação simples e precisa da concentração e viabilidade de PBMC.As amostras coradas com AO/PI podem ser analisadas com o Counstar Rigel
