A contagem de fluorescência dupla AOPI é o tipo de ensaio usado para detectar a concentração e viabilidade das células.A solução é uma combinação de laranja de acridina (a coloração verde fluorescente de ácido nucleico) e iodeto de propídio (a coloração vermelha fluorescente de ácido nucleico).O iodeto de propídio (PI) é um corante de exclusão de membrana que entra apenas nas células com membranas comprometidas, enquanto o laranja de acridina é capaz de penetrar em todas as células de uma população.Quando ambos os corantes estão presentes no núcleo, o iodeto de propídio causa uma redução na fluorescência laranja de acridina por transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET).Como resultado, as células nucleadas com membranas intactas coram em verde fluorescente e são contadas como vivas, enquanto as células nucleadas com membranas comprometidas apenas coram em vermelho fluorescente e são contadas como mortas ao usar o sistema Countstar® FL.Materiais não nucleados, como glóbulos vermelhos, plaquetas e detritos, não fluorescem e são ignorados pelo software Countstar® FL.
Processo de Terapia com Células-Tronco
Figura 4 Monitoramento da viabilidade e contagem de células-tronco mesenquimais (MSCs) para uso em terapias celulares.
Determinar a viabilidade de MSC por ensaio AO/PI e azul de Trypan
Figura 2. A. Imagem de MSC corada por AO/PI e Azul de Trypan;2. Comparação do resultado de AO/PI e azul de Trypan antes e depois do transporte.
O índice de refração da célula muda, a coloração com azul de Trypan não era tão óbvia, é difícil determinar a viabilidade após o transporte.Enquanto a fluorescência de duas cores permite a coloração de células nucleadas vivas e mortas, gerando resultados precisos de viabilidade mesmo na presença de detritos, plaquetas e glóbulos vermelhos.
