Protocolo experimental
A % de citotoxicidade é calculada pela equação abaixo.
% de citotoxicidade = (Contagens vivas de controle - Contagens vivas de tratados) / Contagens vivas de controle × 100
Ao marcar as células tumorais alvo com calceína AM não tóxica e não radioativa ou transfectar com GFP, podemos monitorar a morte das células tumorais por células CAR-T.Enquanto as células cancerígenas alvo vivas serão marcadas por uma calceína verde AM ou GFP, as células mortas não podem reter o corante verde.Hoechst 33342 é usado para corar todas as células (tanto células T quanto células tumorais), alternativamente, as células tumorais alvo podem ser coradas com calceína AM ligada à membrana, PI é usado para corar as células mortas (tanto células T quanto células tumorais).Esta estratégia de coloração permite discriminar células diferentes.
E: Citotoxicidade dependente da razão T de K562
O exemplo de imagens fluorescentes Hoechst 33342, CFSE, PI são as células-alvo K562 em t = 3 horas
As imagens fluorescentes resultantes mostraram aumento nas células-alvo Hoechst+CFSE+PI+ à medida que a razão E:T aumentou
