Sistemul Countstar combină citometrul de imagine și contorul de celule într-un singur instrument de masă.Acest sistem de imagistică celulară, compact și automatizat, bazat pe aplicații, oferă o soluție all-in-one pentru cercetarea celulelor canceroase, inclusiv numărarea celulelor, viabilitate (AO/PI, albastru tripan), apoptoză (Anexin V-FITC/PI), celule ciclu (PI) și transfecția GFP/RFP.
Abstract
Cancerul este una dintre principalele cauze de deces la nivel mondial, iar dezvoltarea de noi metode de tratare a cancerului este de mare importanță.Celula canceroasă este obiectul de cercetare de bază al cancerului, diferite informații trebuie evaluate din celula canceroasă.Acest domeniu de cercetare are nevoie de analiză celulară rapidă, fiabilă, simplă și detaliată.Sistemul Countstar oferă o platformă simplă de soluții pentru analiza celulelor canceroase.
Studiază apoptoza celulelor canceroase de către Countstar Rigel
Testele de apoptoză sunt utilizate în mod obișnuit în multe laboratoare pentru diverse scopuri, de la evaluarea sănătății culturilor celulare până la evaluarea toxicității unui grup de compuși.
Testul de apoptoză este un tip utilizat pentru determinarea procentului de apoptoză a celulelor prin metoda de colorare cu anexină V-FITC/PI.Anexina V se leagă de fosfatidilserina (PS) cu celula de apoptoză timpurie sau celula de necroză.PI intră numai în celulele necrotice/apoptotice în stadiu foarte târziu.(Figura 1)
A: Apoptoză timpurie Anexa V (+), PI (-)
B: Apoptoză târzie Anexa V (+), PI (+)
Figura 1: Detalii mărite ale imaginilor Countstar Rigel (mărire de 5 x) a 293 de celule, tratate cu Annexin V FITC și PI
Analiza ciclului celular al celulei canceroase
Ciclul celular sau ciclul de diviziune celulară este seria de evenimente care au loc într-o celulă care duc la diviziunea și duplicarea ADN-ului acesteia (replicarea ADN-ului) pentru a produce două celule fiice.În celulele cu nucleu, ca și la eucariote, ciclul celular este, de asemenea, împărțit în trei perioade: interfaza, faza mitotică (M) și citokineza.Iodura de propidiu (PI) este un colorant de colorare nucleară care este frecvent utilizat pentru măsurarea ciclului celular.Deoarece colorantul nu poate pătrunde în celulele vii, celulele sunt fixate cu etanol înainte de colorare.Toate celulele sunt apoi colorate.Celulele care se pregătesc pentru diviziune vor conține cantități tot mai mari de ADN și vor afișa o fluorescență proporțională crescută.Diferențele de intensitate a fluorescenței sunt utilizate pentru a determina procentul de celule în fiecare fază a ciclului celular.Countstar poate captura imaginea, iar rezultatele vor fi afișate în software-ul FCS Express.(Figura 2)
Figura 2: MCF-7 (A) și 293T (B) au fost colorate cu kit de detectare a ciclului celular cu PI, rezultatele au fost determinate de Countstar Rigel și analizate prin FCS express.
Determinarea viabilității și a transfecției GFP în celulă
În timpul bioprocesului, GFP este adesea folosit pentru a fuziona cu proteina recombinată ca indicator.Determinați cutia fluorescentă GFP care reflectă expresia proteinei țintă.Countstar Rigel oferă un test rapid și simplu pentru testarea transfecției GFP, precum și a viabilității.Celulele au fost colorate cu iodură de propidiu (PI) și Hoechst 33342 pentru a defini populația de celule moarte și populația totală de celule.Countstar Rigel oferă o metodă rapidă, cantitativă pentru evaluarea eficienței și viabilității expresiei GFP în același timp.(Figura 4)
Figura 4: Celulele sunt localizate folosind Hoechst 33342 (albastru) și procentul de celule care exprimă GFP (verde) poate fi determinat cu ușurință.Celulele neviabile sunt colorate cu iodură de propidiu (PI; roșu).
Viabilitatea și numărul de celule
Numărarea cu fluorescență duală AO/PI este tipul de test utilizat pentru detectarea concentrației celulare, a viabilității.S-a împărțit în numărătoarea liniei celulare și numărarea celulelor primare în funcție de diferitele tipuri de celule.Soluția conține o combinație de colorant verde-fluorescent de acid nucleic, portocaliu acridină și colorantul de acid nucleic fluorescent roșu, iodură de propidiu.Iodura de propidiu este un colorant de excludere a membranei care intră numai în celulele cu membrane compromise, în timp ce portocaliul de acridină pătrunde în toate celulele dintr-o populație.Când ambii coloranți sunt prezenți în nucleu, iodura de propidiu determină o reducere a fluorescenței portocalii de acridină prin transferul de energie de rezonanță a fluorescenței (FRET).Ca rezultat, celulele nucleate cu membrane intacte colorează verde fluorescent și sunt numărate ca vii, în timp ce celulele nucleate cu membrane compromise colorează doar roșu fluorescent și sunt numărate ca moarte când se utilizează sistemul Countstar Rigel.Materialele nenucleate, cum ar fi globulele roșii, trombocitele și resturile nu au fluorescență și sunt ignorate de software-ul Countstar Rigel.(Figura 5)
Figura 5: Countstar a optimizat o metodă de colorare cu dublă fluorescență pentru determinarea simplă și precisă a concentrației și viabilității PBMC.Probele colorate cu AO/PI pot fi analizate cu Counstar Rigel
