Viabilitatea cu fluorescență dublă (AO/PI), portocaliu de acridină (AO) și iodura de propidiu (PI) sunt coloranți de colorare nucleică nucleară și coloranți care leagă acidul.AO poate pătrunde atât în ​​membrana celulelor moarte, cât și a celor vii și poate păta nucleul, generând o fluorescență verde.În schimb, PI poate pătrunde numai în membranele dezintegrate ale celulelor nucleate moarte, generând fluorescență roșie.Tehnologia bazată pe imagini a lui Countstar Rigel exclude fragmentele de celule, resturile și particulele artefacte, precum și evenimentele subdimensionate, cum ar fi trombocitele, oferind un rezultat foarte precis.În concluzie, sistemul Countstar Rigel poate fi folosit pentru fiecare pas al procesului de fabricare a celulei.

Citotoxicitate mediată de celule T/NK, în terapia cu celule CAR-T recent aprobată de FDA, limfocitele T modificate genetic se leagă în mod specific de celulele canceroase vizate (T) și le omoară.Analizoarele Countstar Rigel sunt capabile să analizeze acest proces complet de citotoxicitate mediată de celule T/NK.

Studiile de citotoxicitate sunt efectuate prin etichetarea celulelor canceroase țintă cu CFSE sau transfectarea lor cu GFP.Hoechst 33342 poate fi utilizat pentru a colora toate celulele (atât celulele T, cât și celulele tumorale).Alternativ, celulele tumorale țintă pot fi colorate cu CFSE.Iodura de propidiu (PI) este utilizată pentru colorarea celulelor moarte (atât celulele T, cât și celulele tumorale).Discriminarea între diferite celule poate fi obținută folosind această strategie de colorare.

Eficiența transfecției GFP, în genetica moleculară, diferite organisme model și biologia celulară, gena GFP este frecvent utilizată ca reporter pentru studiile de expresie.În prezent, oamenii de știință folosesc în mod obișnuit microscoape fluorescente sau citometre de flux pentru a analiza eficiența transfecției celulelor de mamifere.Dar manipularea tehnologiei complexe a unui citometru de flux avansat necesită un operator experimentat și înalt calificat.Countstar Rigel permite utilizatorilor să efectueze cu ușurință și precizie un test de eficiență a transfecției, fără costurile de operare și întreținere asociate citometriei în flux tradiționale.

Apoptoza celulară, progresul apoptozei celulare poate fi monitorizată utilizând Annexin-V conjugat cu FITC în combinație cu 7-ADD.Reziduurile de fosfatidilserina (PS) sunt localizate în mod normal în partea interioară a membranei plasmatice a celulelor sănătoase.În timpul apoptozei timpurii, integritatea membranei se pierde și PS va fi translocat în exteriorul membranei celulare.Anexina V are o afinitate puternică pentru PS și, prin urmare, este markerul ideal pentru celulele apoptotice timpurii.

Ciclul celular, în timpul diviziunii celulare, celulele conțin cantități crescute de ADN.Marcată de PI, o creștere a intensității fluorescenței este direct proporțională cu o acumulare de ADN.Diferențele dintre intensitățile de fluorescență ale celulelor individuale sunt indicatori ai stării actuale a ciclului celular. Celulele MCF 7 au fost tratate cu 4μM de Nocodazol pentru a opri aceste celule în diferite etape ale ciclului lor celular.Imaginile cu câmp luminos dobândite în timpul acestui scenariu de testare ne permit să identificăm fiecare celulă.Canalul de fluorescență PI al Countstar Rigel identifică semnalele ADN ale celulelor individuale chiar și în agregate.O analiză detaliată a intensităților fluorescenței poate fi efectuată folosind FCS.

Fenotiparea CD Marker, modelele Countstar Rigel oferă o abordare mai rapidă, mai simplă și mai sensibilă a fenotipării celulelor bazate pe imuno și mai eficientă.Cu imagini de înaltă rezoluție și capabilități puternice integrate de analiză a datelor, Countstar Rigel permite utilizatorilor să obțină rezultate fiabile în mod constant, fără a fi nevoie de setări complexe extinse de control și ajustări de compensare a fluorescenței.

Diferențierea celulelor Cytokine Induced Killer (CIK) demonstrează calitatea remarcabilă a performanței analizorului Countstar Rigel în comparație directă cu citometrele de flux de înaltă clasă.PBMC-urile de șoarece în cultură au fost colorate cu CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE și CD56-PE și induse de Interleukina (IL) 6. Apoi au fost analizate simultan cu Countstar® Rigel și citometrie în flux.În acest test, CD3-CD4, CD3-CD8 și CD3-CD56 au fost împărțite în trei grupuri, pentru a determina proporția diferitelor subpopulații de celule.

Detectarea celulelor degenerate prin imunofluorescență, anticorpii monoclonali care produc linii celulare vor pierde unele clone pozitive în timpul proliferării și trecerii celulare din cauza degradării sau mutațiilor genetice.O pierdere mai mare va afecta semnificativ productivitatea procesului de fabricație.Monitorizarea degradării joacă un rol important în controlul procesului pentru a schimba randamentul de anticorpi la optim.

Majoritatea anticorpilor fabricați în industria BioPharma pot fi detectați prin imunofluorescență și analizați cantitativ de seria Countstar Rigel.Imaginile cu câmp luminos și canale de fluorescență de mai jos arată clar acele clone care și-au pierdut atributul de a produce anticorpii doriti.Analiza mai detaliată cu software-ul DeNovo FCS Express Image confirmă că 86,35 % din toate celulele exprimă imunoglobulinele, doar 3,34 % sunt în mod clar negative.

Numărarea celulelor cu tripan (majusculă B în albastru), colorarea cu albastru tripan este încă utilizată în majoritatea laboratoarelor de cultură celulară.

BioApp-ul Trypan Blue Viability and Cell Density poate fi instalat pe toate modelele Countstar Rigel.Algoritmii noștri de recunoaștere a imaginilor protejate analizează mai mult de 20 de parametri pentru a clasifica fiecare obiect detectat.

Cell Line Storage QC, în stocarea celulară, un concept sofisticat de management al calității asigură monitorizarea sigură și eficientă a tuturor produselor celulare.Acest lucru garantează calitatea stabilă a celulelor crioconservate, crioconservate pentru experimente, dezvoltarea procesului și producția.

Countstar Rigel dobândește imagini de înaltă rezoluție, analizând diverse caracteristici morfologice ale obiectelor celulare, cum ar fi diametrul, forma și tendința de agregare.Imaginile diferitelor etape ale procesului pot fi ușor comparate între ele.Deci variațiile de formă și agregare pot fi detectate cu ușurință, evitând măsurătorile umane subiective.Iar baza de date Countstar Rigel are un sistem de management sofisticat pentru stocarea și preluarea imaginilor și datelor.