Protocolul experimental
% de citotoxicitate se calculează prin ecuația de mai jos.
Citotoxicitate % = (Numărări vii ale martor – Numărări vii ale celor tratați) / Numărări vii ale martor × 100
Prin etichetarea celulelor tumorale țintă cu calceină AM netoxică, neradioactivă sau transfectarea cu GFP, putem monitoriza uciderea celulelor tumorale de către celulele CAR-T.În timp ce celulele canceroase țintă vii vor fi etichetate cu o calceină verde AM sau GFP, celulele moarte nu pot reține colorantul verde.Hoechst 33342 este utilizat pentru colorarea tuturor celulelor (atât celulele T, cât și celulele tumorale), alternativ, celulele tumorale țintă pot fi colorate cu calceină AM legată de membrană, PI este utilizat pentru colorarea celulelor moarte (atât celulele T, cât și celulele tumorale).Această strategie de colorare permite discriminarea diferitelor celule.
E: T Citotoxicitatea dependentă de raportul K562
Exemplul de imagini fluorescente Hoechst 33342, CFSE, PI sunt celulele țintă K562 la t = 3 ore
Imaginile fluorescente rezultate au arătat o creștere a celulelor țintă Hoechst+CFSE+PI+ pe măsură ce raportul E:T a crescut
