Система объединяет цитометр изображения и счетчик клеток в единый настольный прибор.Эта управляемая приложением, компактная и автоматизированная система визуализации клеток представляет собой универсальное решение для исследования раковых клеток, включая подсчет клеток, жизнеспособность (AO/PI, трипановый синий), апоптоз (Annexin V-FITC/PI), клетки цикл (PI) и трансфекция GFP/RFP.
Абстрактный
Рак является одной из основных причин смерти во всем мире, и разработка новых методов лечения рака имеет большое значение.Раковая клетка является основным объектом исследования рака, и необходимо получить различную информацию от раковой клетки.Эта область исследований нуждается в быстром, надежном, простом и подробном анализе клеток.Система представляет собой простую платформу решений для анализа раковых клеток.
Исследование апоптоза раковых клеток от Countstar Rigel
Анализы апоптоза обычно используются во многих лабораториях для различных целей, от оценки здоровья клеточных культур до оценки токсичности группы соединений.
Анализ апоптоза представляет собой тип, используемый для определения процента апоптоза клеток методом окрашивания аннексином V-FITC/PI.Аннексин V связывается с фосфатидилсерином (PS) с клетками раннего апоптоза или клетками некроза.PI проникает только в некротические/очень поздние апоптотические клетки.(Фигура 1)
A： Ранний апоптоз Аннексин V (+), PI (-)
B：Поздний апоптоз Аннексин V (+), PI (+)
Рисунок 1: Увеличенные детали изображений Countstar Rigel (5-кратное увеличение) 293 клеток, обработанных аннексином V FITC и PI.
Анализ клеточного цикла раковой клетки
Клеточный цикл или цикл клеточного деления — это серия событий, происходящих в клетке, ведущих к ее делению и удвоению ее ДНК (репликация ДНК) с образованием двух дочерних клеток.В клетках с ядром, как и у эукариот, клеточный цикл также делится на три периода: интерфаза, митотическая (М) фаза и цитокинез.Йодид пропидия (PI) представляет собой краситель для окрашивания ядер, который часто используется для измерения клеточного цикла.Поскольку краситель не может попасть в живые клетки, перед окрашиванием клетки фиксируют этанолом.Затем все клетки окрашивают.Клетки, готовящиеся к делению, будут содержать все большее количество ДНК и будут демонстрировать пропорционально повышенную флуоресценцию.Различия в интенсивности флуоресценции используются для определения процента клеток в каждой фазе клеточного цикла. может захватить изображение, и результаты будут отображаться в экспресс-программном обеспечении FCS.(Фигура 2)
Рисунок 2: MCF-7 (A) и 293T (B) были окрашены с помощью набора для обнаружения клеточного цикла с PI, результаты были определены с помощью Countstar Rigel и проанализированы с помощью FCS Express.
Определение жизнеспособности и трансфекции GFP в клетке
Во время биопроцесса GFP часто используется для слияния с рекомбинантным белком в качестве индикатора.Определите, что флуоресцентный GFP может отражать экспрессию целевого белка. предлагает быстрый и простой анализ для тестирования трансфекции GFP, а также жизнеспособности.Клетки окрашивали йодидом пропидия (PI) и красителем Hoechst 33342 для определения популяции мертвых клеток и общей клеточной популяции. предлагает быстрый количественный метод одновременной оценки эффективности и жизнеспособности экспрессии GFP.(Рисунок 4)
Рисунок 4: Клетки расположены с использованием Hoechst 33342 (синий), и можно легко определить процент клеток, экспрессирующих GFP (зеленый).Нежизнеспособные клетки окрашивают йодидом пропидия (PI; красный).
Жизнеспособность и количество клеток
AO/PI Двойной флуоресцентный подсчет — это тип анализа, используемый для определения концентрации и жизнеспособности клеток.Он разделен на подсчет клеточных линий и подсчет первичных клеток в соответствии с различным типом клеток.Раствор содержит комбинацию зелено-флуоресцентного красителя нуклеиновой кислоты, акридинового оранжевого, и краснофлуоресцентного красителя нуклеиновой кислоты, йодида пропидия.Йодид пропидия представляет собой краситель, исключающий мембраны, который проникает только в клетки с поврежденными мембранами, в то время как акридиновый оранжевый проникает во все клетки популяции.Когда в ядре присутствуют оба красителя, йодид пропидия вызывает снижение флуоресценции акридинового оранжевого за счет резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET).В результате ядросодержащие клетки с неповрежденными мембранами окрашиваются флуоресцентно-зеленым цветом и считаются живыми, тогда как ядросодержащие клетки с поврежденными мембранами окрашиваются только флуоресцентно-красным цветом и считаются мертвыми при использовании системы .Материалы без ядер, такие как эритроциты, тромбоциты и дебрис, не флуоресцируют и игнорируются программным обеспечением .(Рисунок 5)
Рисунок 5: оптимизировала метод двойного флуоресцентного окрашивания для простого и точного определения концентрации и жизнеспособности РВМС.Образцы, окрашенные AO/PI, можно анализировать с помощью Counstar Rigel.
