Двойной флуоресцентный подсчет AOPI — это тип анализа, используемый для определения концентрации и жизнеспособности клеток.Раствор представляет собой комбинацию акридинового оранжевого (зеленая флуоресцентная окраска нуклеиновой кислоты) и йодида пропидия (красная флуоресцентная окраска нуклеиновой кислоты).Йодид пропидия (PI) представляет собой краситель для исключения мембран, который проникает только в клетки с поврежденными мембранами, в то время как акридиновый оранжевый способен проникать во все клетки в популяции.Когда в ядре присутствуют оба красителя, йодид пропидия вызывает снижение флуоресценции акридинового оранжевого за счет резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET).В результате ядросодержащие клетки с неповрежденными мембранами окрашиваются флуоресцентно-зеленым цветом и считаются живыми, тогда как ядросодержащие клетки с нарушенными мембранами окрашиваются только флуоресцентно-красным цветом и считаются мертвыми при использовании системы FL.Материалы без ядер, такие как эритроциты, тромбоциты и дебрис, не флуоресцируют и игнорируются программным обеспечением FL.
Процесс терапии стволовыми клетками
Рисунок 4 Мониторинг жизнеспособности и количества клеток мезенхимальных стволовых клеток (МСК) для использования в клеточной терапии.
Определить жизнеспособность МСК с помощью анализа AO/PI и трипанового синего
Рис. 2. А. Изображение МСК, окрашенных АО/ПИ и трипановым синим;2. Сравнение результатов АО/ПИ и трипанового синего до и после транспортировки.
Изменяется показатель преломления клеток, окраска трипановым синим не столь очевидна, трудно определить жизнеспособность после транспортировки.В то время как двухцветная флуоресценция позволяет окрашивать живые и мертвые ядросодержащие клетки, получая точные результаты жизнеспособности даже в присутствии дебриса, тромбоцитов и эритроцитов.
