Экспериментальный протокол
% цитотоксичности рассчитывают по приведенному ниже уравнению.
Цитотоксичность, % = (количество живых клеток в контроле – количество живых клеток в группе лечения) / число живых клеток в контроле × 100
Помечая опухолевые клетки-мишени нетоксичным, нерадиоактивным кальцеином AM или трансфицируя GFP, мы можем контролировать уничтожение опухолевых клеток CAR-T-клетками.В то время как живые раковые клетки-мишени будут помечены зеленым кальцеином AM или GFP, мертвые клетки не могут удерживать зеленый краситель.Hoechst 33342 используется для окрашивания всех клеток (как Т-клеток, так и опухолевых клеток), альтернативно, опухолевые клетки-мишени могут быть окрашены мембраносвязанным кальцеином AM, а PI используется для окрашивания мертвых клеток (как Т-клеток, так и опухолевых клеток).Эта стратегия окрашивания позволяет различать разные клетки.
E: Зависимая от отношения T цитотоксичность K562
Пример Hoechst 33342, CFSE, флуоресцентные изображения PI представляют собой клетки-мишени K562 при t = 3 часа.
Полученные флуоресцентные изображения показали увеличение числа клеток-мишеней Hoechst+CFSE+PI+ по мере увеличения отношения E:T.
