خلاصو: Mesenchymal اسٽيم سيلز pluripotent اسٽيم سيلز جو ھڪڙو ذيلي سيٽ آھن جيڪي ميسوڊرم کان الڳ ٿي سگھن ٿا.انهن جي خود نقل جي تجديد ۽ گهڻ طرفي تفاوت جي خاصيتن سان، انهن وٽ دوا ۾ مختلف علاج جي اعلي صلاحيت آهي.Mesenchymal اسٽيم سيلز ۾ هڪ منفرد مدافعتي فينو ٽائپ ۽ مدافعتي ضابطي جي صلاحيت آهي.تنهن ڪري، mesenchymal اسٽيم سيل اڳ ۾ ئي وڏي پيماني تي اسٽيم سيل ٽرانسپلانٽشن، ٽشو انجنيئرنگ، ۽ عضون جي منتقلي ۾ استعمال ڪيا ويا آهن.۽ انهن ايپليڪيشنن کان ٻاهر، اهي ٽشو انجنيئرنگ ۾ هڪ مثالي اوزار طور استعمال ڪيا ويا آهن جيئن بنيادي ۽ ڪلينڪل تحقيقي تجربن جي سلسلي ۾ سيڊر سيلز.هينئر تائين، ميسينچيمل اسٽيم سيلز جي معيار تي ضابطو آڻڻ لاءِ ڪو وسيع قبول ٿيل طريقو ۽ معيار موجود ناهي.Countstar Rigel انهن اسٽيم سيلز جي پيداوار ۽ فرق جي دوران ڪنسنٽريشن، قابليت، ۽ فينوٽائپ خاصيتن (۽ انهن جي تبديلين) جي نگراني ڪري سگهي ٿو.Countstar Rigel کي اضافي مورفولوجي معلومات حاصل ڪرڻ ۾ پڻ فائدو حاصل آهي، جيڪا سيل جي معيار جي نگراني جي پوري عمل دوران مستقل روشن فيلڊ ۽ فلوروسينس تي ٻڌل تصويري رڪارڊنگ ذريعي مهيا ڪئي وئي آهي.Countstar Rigel اسٽيم سيلز جي معيار کي ڪنٽرول ڪرڻ لاء هڪ تيز، نفيس ۽ قابل اعتماد طريقو پيش ڪري ٿو.
مواد ۽ طريقا:
Adipose-derived mesenchymal اسٽيم سيلز (AdMSCs) تحفا ڏنا ويا پروفيسر Nianmin Qi، AO/PI اسٽيننگ حل (شنگھائي RuiYu، CF002).اينٽي باڊي: CD29، CD34، CD45، CD56، CD73، CD105، HLADR (BD ڪمپني).
AdMSCs هڪ 37℃، 5% CO2 humidified incubator ۾ ڪلچر ڪيا ويا.استعمال ڪرڻ کان اڳ ٽريپسن سان هضم ڪريو.
سي ڊي مارڪر جي داغ جي طريقيڪار کي اينٽي باڊي جي دستياب طور تي عمل ڪيو ويو.
Countstar Rigel سان سي ڊي مارڪر جو پتو لڳائڻ:
1. هڪ سگنل-رنگ ايپليڪيشن طريقيڪار ٺاهي وئي پي اي چينل کي ترتيب ڏيڻ سان تصوير PE فلورسنس کي.
2. 3 شعبا هر چيمبر مان قبضو ڪيا ويا.
3. تصويري ۽ ابتدائي تجزيو مڪمل ٿيڻ کان پوءِ، مثبت ۽ منفي منتقلي لاءِ حد (لاگ گيٽ) سيٽنگ FCS سافٽ ويئر پاران مقرر ڪئي وئي.
اسٽيم سيل جي معيار جو ڪنٽرول
هيٺ ڏنل شڪل (شڪل 1) جي طريقيڪار کي ڏيکاري ٿو اسٽيم سيل جو علاج .
شڪل 1: اسٽيم سيل جي علاج جو طريقو
نتيجا:
AdMSCs جي ڪنسنٽريشن، وابستگي، قطر، ۽ مجموعي جو تعين ڪرڻ.
AdMSCs جي وابستگي AO/PI پاران طئي ڪئي وئي هئي، هڪ ٻٽي رنگ جي ايپليڪيشن جو طريقو ٺاهيو ويو گرين چينل ۽ ريڊ چينل کي تصوير AO ۽ PI فلوروسينس، گڏوگڏ هڪ روشن ميدان.مثال طور تصويرون تصوير 2 ۾ ڏيکاريا ويا آهن.
شڪل 2. AdMSCs جي نقل و حمل کان اڳ ۽ بعد ۾ تصويرون.A. ٽرانسپورٽ کان اڳ؛هڪ نمائندي تصوير ڏيکاريل آهي.B. ٽرانسپورٽ کان پوء؛هڪ نمائندي تصوير ڏيکاريل آهي.
AdMSCs جي وابستگي وڏي پيماني تي تبديل ٿي وئي ٽرانسپورٽ کان پوء جڏهن ٽرانسپورٽ کان اڳ جي مقابلي ۾.نقل و حمل کان اڳ قابل عمل 92٪ هو، پر ٽرانسپورٽ کان پوء 71٪ تائين گهٽجي ويو.نتيجو تصوير 3 ۾ ڏيکاريو ويو آهي.
شڪل 3. AdMSCs جا قابل عمل نتيجا (ٽرانسپورٽ کان اڳ ۽ ٽرانسپورٽ کان پوءِ)
قطر ۽ مجموعي پڻ ڳڻپيوڪر ريگل پاران طئي ڪيا ويا.AdMSCs جو قطر وڏي پيماني تي تبديل ڪيو ويو نقل و حمل کان پوء جڏهن ٽرانسپورٽ کان اڳ جي مقابلي ۾.نقل و حمل کان اڳ قطر 19µm هو، پر نقل و حمل کان پوءِ اهو وڌي 21µm ٿي ويو.ٽرانسپورٽ کان اڳ جو مجموعو 20٪ هو، پر ٽرانسپورٽ کان پوء 25٪ تائين وڌايو ويو.Countstar Rigel پاران قبضو ڪيل تصويرن مان، AdMSCs جي فينوٽائپ ٽرانسپورٽ کان پوء تبديل ٿي ويا.نتيجا شڪل 4 ۾ ڏيکاريا ويا.
شڪل 4: قطر ۽ مجموعي جا نتيجا.A: AdMSCs جي نمائندن جون تصويرون، AdMSCs جو فينوٽائپ ٽرانسپورٽ کان پوء تبديل ٿي ويا.ب: آمد و رفت کان اڳ مجموعي 20 سيڪڙو هئي، پر ٽرانسپورٽ کان پوءِ 25 سيڪڙو تائين وڌي وئي.ج: نقل و حمل کان اڳ قطر 19µm هو، پر نقل و حمل کان پوءِ 21µm تائين وڌي ويو.
Countstar Rigel پاران AdMSCs جي امونوفينوٽائپ جو اندازو لڳايو
AdMSCs جي immunophenotype جو تعين ڪيو ويو Countstar Rigel پاران، AdMSCs مختلف اينٽي باڊيز سان ترتيب ڏني وئي (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).هڪ سگنل-رنگ ايپليڪيشن پروسيسنگ ٺاهي وئي گرين چينل کي ترتيب ڏيڻ لاءِ تصوير PE فلورسنس سان گڏ هڪ روشن ميدان.روشن فيلڊ تصويري حوالن واري حصي کي لاڳو ڪيو ويو ماسڪ جي طور تي پي اي فلورسنس سگنل کي نموني ڏيڻ لاءِ.CD105 جا نتيجا ڏيکاريا ويا (شڪل 5).
شڪل 5: AdMSCs جا CD105 نتيجا Countstar Rigel پاران طئي ڪيا ويا.ج: ايف سي ايس ايڪسپريس 5 پلس سافٽ ويئر پاران مختلف نمونن ۾ CD105 جي مثبت سيڪڙو جو مقداري تجزيو.ب: اعلي معيار جون تصويرون اضافي مورفولوجي معلومات فراهم ڪن ٿيون.ج: هر هڪ سيل جي ٿوم نيلس ذريعي تصديق ٿيل نتيجا، FCS سافٽ ويئر ٽولز سيلز کي مختلف گروپن ۾ ورهايو انهن جي مختلف پروٽين جي اظهار جي مطابق.
ٻيا اينٽي باڊيز جا نتيجا ڏيکاريا ويا تصوير 6 ۾
شڪل 6: A: ASCs جو نمائندو تصوير عام اسپنڊل جي شڪل واري مورفولوجي سان.OLYMPUS خوردبيني طرفان قبضو ڪيو ويو.اصل واڌارو، (10x).ب: ASCs جي Adipogenic تفاوت روٿينيم ريڊ اسٽيننگ جي ذريعي ڏيکاريل آهي معدنيات جي علائقن کي ڏيکاريندي.OLYMPUS خوردبيني طرفان قبضو ڪيو ويو.اصل واڌارو (10x).ج: Countstar FL جي خصوصيت ASCs.
خلاصو:
Countstar FL انهن اسٽيم سيلز جي پيداوار ۽ فرق جي دوران ڪنسنٽريشن، قابليت، ۽ فينوٽائپ خاصيتن (۽ انهن جي تبديلين) جي نگراني ڪري سگهي ٿو.FCS ايڪسپريس هر سگنل سيل جو جائزو وٺڻ لاء فنڪشن فراهم ڪري ٿو، تصوير ذريعي ڊيٽا کي درست ڪريو.استعمال ڪندڙ کي ڳڻپ اسٽار ريگل جي نتيجن جي بنياد تي ايندڙ تجربن کي انجام ڏيڻ لاء اعتماد پڻ حاصل ڪري سگھي ٿو.Countstar Rigel اسٽيم سيلز جي معيار کي ڪنٽرول ڪرڻ لاء هڪ تيز، نفيس ۽ قابل اعتماد طريقو پيش ڪري ٿو.
