Countstar පද්ධතිය රූප සයිටෝමීටරය සහ සෛල කවුන්ටරය තනි බංකුවක් උඩ උපකරණයක් බවට ඒකාබද්ධ කරයි.මෙම යෙදුම මත පදනම් වූ, සංයුක්ත සහ ස්වයංක්‍රීය සෛල රූපකරණ පද්ධතිය සෛල ගණනය කිරීම, ශක්යතාව (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), සෛල ඇතුළුව පිළිකා සෛල පර්යේෂණ සඳහා සියල්ලට-එක් විසඳුමක් සපයයි. චක්රය (PI), සහ GFP/RFP මාරු කිරීම.
වියුක්ත
පිළිකා ලොව පුරා සිදුවන මරණවලට ප්‍රධානතම හේතුව වන අතර නව පිළිකා ප්‍රතිකාර ක්‍රම දියුණු කිරීම ඉතා වැදගත් වේ.පිළිකා සෛලය පිළිකාවේ මූලික පර්යේෂණ වස්තුව වන අතර, පිළිකා සෛලයෙන් විවිධ තොරතුරු ඇගයීමට ලක් කළ යුතුය.මෙම පර්යේෂණ ප්‍රදේශයට වේගවත්, විශ්වසනීය, සරල සහ සවිස්තරාත්මක සෛල විශ්ලේෂණයක් අවශ්‍ය වේ.Countstar පද්ධතිය පිළිකා සෛල විශ්ලේෂණය සඳහා සරල විසඳුම් වේදිකාවක් සපයයි.
Countstar Rigel විසින් පිළිකා සෛල ඇපොප්ටෝසිස් අධ්‍යයනය කරන්න
සෛල සංස්කෘතීන්ගේ සෞඛ්‍යය තක්සේරු කිරීමේ සිට සංයෝග පුවරුවක විෂ බව තක්සේරු කිරීම දක්වා විවිධ අරමුණු සඳහා බොහෝ රසායනාගාරවල ඇපොප්ටෝසිස් පරීක්ෂණ සාමාන්‍යයෙන් භාවිතා වේ.
ඇපොප්ටෝසිස් විශ්ලේෂණය යනු ඇනෙක්සින් V-FITC/PI පැල්ලම් කිරීමේ ක්‍රමය මගින් සෛලවල ඇපොප්ටෝසිස් ප්‍රතිශතය තීරණය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන වර්ගයකි.ඇනෙක්සින් V මුල් ඇපොප්ටෝසිස් සෛල හෝ නෙරෝසිස් සෛල සමඟ ෆොස්ෆැටයිඩයිල්සෙරීන් (PS) සමඟ බන්ධනය වේ.PI ඇතුල් වන්නේ නික්‍රෝටික්/ඉතා ප්‍රමාද වූ ඇපොප්ටෝටික් සෛලවලට පමණි.(රූපය 1)
A: මුල් ඇපොප්ටෝසිස් ඇනෙක්සින් V (+), PI (-)
B: ප්‍රමාද ඇපොප්ටෝසිස් ඇනෙක්සින් V (+), PI (+)
රූපය1: ඇනෙක්සින් V FITC සහ PI සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද සෛල 293 ක Countstar Rigel පින්තූර (5 x විශාලනය) විශාල කළ විස්තර
පිළිකා සෛලයේ සෛල චක්‍ර විශ්ලේෂණය
සෛල චක්රය හෝ සෛල බෙදීමේ චක්රය යනු සෛලයක සිදු වන සිදුවීම් මාලාවක් වන අතර එය එහි බෙදීමට සහ එහි DNA (ඩීඑන්ඒ ප්‍රතිනිර්මාණය) අනුපිටපත් කර දියණිය සෛල දෙකක් නිපදවීමට හේතු වේ.න්‍යෂ්ටියක් සහිත සෛලවල, යුකැරියෝට්වල මෙන්, සෛල චක්රය කාල පරිච්ඡේද තුනකට බෙදා ඇත: අන්තර් අවධි, මයිටොටික් (M) අදියර සහ සයිටොකිනේසිස්.ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් (PI) යනු සෛල චක්රය මැනීමට නිතර භාවිතා කරන න්‍යෂ්ටික පැල්ලම් සායම් වර්ගයකි.ඩයි වලට සජීවී සෛල වලට ඇතුල් විය නොහැකි නිසා, සෛල පැල්ලම් කිරීමට පෙර එතනෝල් සමඟ සවි කර ඇත.එවිට සෛල සියල්ලම පැල්ලම් කරනු ලැබේ.බෙදීමට සූදානම් වන සෛලවල වැඩිවන DNA ප්‍රමාණයන් අඩංගු වන අතර සමානුපාතිකව වැඩි වූ ප්‍රතිදීප්තතාව පෙන්වයි.සෛල චක්‍රයේ එක් එක් අදියරෙහි සෛල ප්‍රතිශතය තීරණය කිරීම සඳහා ප්‍රතිදීප්ත තීව්‍රතාවයේ වෙනස්කම් භාවිතා වේ.Countstar හට රූපය ග්‍රහණය කර ගත හැකි අතර ප්‍රතිඵල FCS එක්ස්ප්‍රස් මෘදුකාංගය තුළ පෙන්වනු ඇත.(රූපය 2)
රූපය 2: MCF-7 (A) සහ 293T (B) PI සමඟ සෛල චක්‍ර හඳුනාගැනීමේ කට්ටලය සමඟ පැල්ලම් කර ඇත, ප්‍රතිඵල Countstar Rigel විසින් තීරණය කරන ලද අතර FCS අධිවේගී මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.
සෛල තුළ ශක්යතාව සහ GFP සංක්‍රමණ නිර්ණය
ජෛව ක්‍රියාවලියේදී, GFP බොහෝ විට දර්ශකයක් ලෙස ප්‍රතිසංයෝජක ප්‍රෝටීන සමඟ ඒකාබද්ධ කිරීමට භාවිතා කරයි.ඉලක්කගත ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශනය පිළිබිඹු කළ හැකි GFP ප්‍රතිදීප්ත බව තීරණය කරන්න.Countstar Rigel GFP සංක්‍රමණය මෙන්ම ශක්යතාව පරීක්ෂා කිරීම සඳහා වේගවත් හා සරල පරීක්ෂණයක් ඉදිරිපත් කරයි.මිය ගිය සෛල ජනගහනය සහ මුළු සෛල ජනගහනය නිර්වචනය කිරීම සඳහා සෛල ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් (PI) සහ Hoechst 33342 සමඟ පැල්ලම් කරන ලදී.Countstar Rigel GFP ප්‍රකාශන කාර්යක්ෂමතාව සහ ශක්යතාව එකවර ඇගයීම සඳහා ඉක්මන්, ප්‍රමාණාත්මක ක්‍රමයක් ඉදිරිපත් කරයි.(රූපය 4)
රූප සටහන 4: සෛල Hoechst 33342 (නිල්) භාවිතයෙන් පිහිටා ඇති අතර GFP ප්‍රකාශන සෛල ප්‍රතිශතය (කොළ) පහසුවෙන් තීරණය කළ හැක.ශක්‍ය නොවන සෛල ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් (PI; රතු) වලින් වර්ණාලේප කර ඇත.
ශක්යතාව සහ සෛල ගණන
AO/PI ද්විත්ව ප්‍රතිදීප්ත ගණනය කිරීම යනු සෛල සාන්ද්රණය, ශක්යතාව හඳුනා ගැනීම සඳහා භාවිතා කරන විශ්ලේෂණ වර්ගයයි.එය විවිධ සෛල වර්ග අනුව සෛල රේඛා ගණන් කිරීම සහ ප්‍රාථමික සෛල ගණන් කිරීම ලෙස බෙදා ඇත.ද්‍රාවණයේ හරිත ප්‍රතිදීප්ත න්‍යෂ්ටික අම්ල පැල්ලම, ඇක්‍රිඩින් තැඹිලි සහ රතු ප්‍රතිදීප්ත න්‍යෂ්ටික අම්ල පැල්ලම, ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් යන සංයෝග අඩංගු වේ.ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් යනු පටල බැහැර කිරීමේ ඩයි වර්ගයක් වන අතර එය සම්මුතිගත පටල සහිත සෛලවලට පමණක් ඇතුළු වන අතර ඇක්‍රයිඩින් තැඹිලි ජනගහනයක සියලුම සෛල විනිවිද යයි.සායම් දෙකම න්‍යෂ්ටිය තුළ පවතින විට, ප්‍රොපිඩියම් අයඩයිඩ් ප්‍රතිදීප්ත අනුනාද ශක්ති හුවමාරුව (FRET) මගින් ඇක්‍රයිඩින් තැඹිලි ප්‍රතිදීප්තියේ අඩුවීමක් ඇති කරයි.එහි ප්‍රතිඵලයක් වශයෙන්, නොවෙනස්ව පවතින පටල සහිත න්‍යෂ්ටික සෛල ප්‍රතිදීප්ත කොළ පැහැයෙන් වර්ණාලේප කර සජීවී ලෙස ගණන් ගනු ලැබේ, නමුත් සම්මුතියට පත් පටල සහිත න්‍යෂ්ටික සෛල ප්‍රතිදීප්ත රතු පැහැයෙන් පමණක් වර්ණාලේප කරන අතර Countstar Rigel පද්ධතිය භාවිතා කරන විට මිය ගොස් ඇත.රතු රුධිර සෛල, පට්ටිකා සහ සුන්බුන් වැනි න්‍යෂ්ටික නොවන ද්‍රව්‍ය ප්‍රතිදීප්ත නොවන අතර Countstar Rigel මෘදුකාංගය මගින් නොසලකා හරිනු ලැබේ.(රූපය 5)
රූපය 5: Countstar විසින් PBMC සාන්ද්රණය සහ ශක්යතාව සරල, නිවැරදිව නිර්ණය කිරීම සඳහා ද්විත්ව ප්‍රතිදීප්ත වර්ණ ගැන්වීමේ ක්‍රමයක් ප්‍රශස්ත කර ඇත.AO/PI සමඟ වර්ණ ගැන්වූ සාම්පල Counstar Rigel සමඟ විශ්ලේෂණය කළ හැක
