AOPI Dual-fluoresces counting je typ testu používaný na detekciu bunkovej koncentrácie a životaschopnosti.Roztok je kombináciou akridínovej oranžovej (zeleno-fluorescenčné farbivo nukleovej kyseliny) a propídiumjodidu (červeno fluoreskujúce farbivo nukleovej kyseliny).Propidium jodid (PI) je membránové vylučovacie farbivo, ktoré vstupuje len do buniek s poškodenými membránami, zatiaľ čo akridínová oranž je schopná preniknúť do všetkých buniek v populácii.Keď sú v jadre prítomné obe farbivá, propídiumjodid spôsobí zníženie fluorescencie akridínovej oranže prenosom fluorescenčnej rezonančnej energie (FRET).Výsledkom je, že bunky s jadrami s neporušenými membránami sa farbia fluorescenčne na zeleno a počítajú sa ako živé, zatiaľ čo bunky s jadrami s narušenými membránami sa farbia iba fluorescenčnou červenou farbou a pri použití systému Countstar® FL sa počítajú ako mŕtve.Materiál bez jadier, ako sú červené krvinky, krvné doštičky a zvyšky, nefluoreskujú a softvér Countstar® FL ich ignoruje.
Proces liečby kmeňovými bunkami
Obrázok 4 Monitorovanie životaschopnosti a počtu buniek mezenchymálnych kmeňových buniek (MSC) na použitie v bunkových terapiách.
Stanovte životaschopnosť MSC pomocou testu AO/PI a trypánovej modrej
Obrázok 2. A. Obrázok MSC zafarbeného AO/PI a trypánovou modrou;2. Porovnanie výsledku AO/PI a trypánovej modrej pred a po transporte.
Index lomu buniek sa mení, farbenie trypánovou modrou nebolo také zrejmé, je ťažké určiť životaschopnosť po transporte.Zatiaľ čo dvojfarebná fluorescencia umožňuje farbenie živých a mŕtvych buniek s jadrom, vytváranie presných výsledkov životaschopnosti aj v prítomnosti zvyškov, krvných doštičiek a červených krviniek.
