Experimentálny protokol
Percento cytotoxicity sa vypočíta podľa nižšie uvedenej rovnice.
Cytotoxicita % = (živé počty kontroly – živé počty liečených) / živé počty kontrol × 100
Označením cieľových nádorových buniek netoxickým, nerádioaktívnym kalceínom AM alebo transfekciou s GFP môžeme monitorovať zabíjanie nádorových buniek bunkami CAR-T.Zatiaľ čo živé cieľové rakovinové bunky budú označené zeleným kalceínom AM alebo GFP, mŕtve bunky si zelené farbivo neudržia.Hoechst 33342 sa používa na farbenie všetkých buniek (ako T buniek, tak aj nádorových buniek), alternatívne je možné cieľové nádorové bunky farbiť kalceínom AM viazaným na membránu, PI sa používa na farbenie mŕtvych buniek (T buniek aj nádorových buniek).Táto stratégia farbenia umožňuje rozlíšenie rôznych buniek.
E: Cytotoxicita K562 závislá od pomeru T
Príklady fluorescenčných obrázkov Hoechst 33342, CFSE, PI sú cieľové bunky K562 v čase t = 3 hodiny
Výsledné fluorescenčné snímky ukázali zvýšenie cieľových buniek Hoechst+CFSE+PI+ so zvyšujúcim sa pomerom E:T
