povzetek: Mezenhimske matične celice so podskupina pluripotentnih matičnih celic, ki jih je mogoče izolirati iz mezoderme.S svojo lastnostjo obnove samoreplikacije in večsmerne diferenciacije imajo velik potencial za različne terapije v medicini.Mezenhimske matične celice imajo edinstven imunski fenotip in sposobnost imunske regulacije.Zato se mezenhimske matične celice že pogosto uporabljajo pri presaditvah matičnih celic, tkivnem inženirstvu in presaditvi organov.Poleg teh aplikacij se uporabljajo kot idealno orodje v tkivnem inženirstvu kot sejalne celice v vrsti osnovnih in kliničnih raziskovalnih poskusov.Do zdaj ni splošno sprejete metode in standarda za nadzor kakovosti mezenhimskih matičnih celic.Countstar Rigel lahko spremlja koncentracijo, sposobnost preživetja in značilnosti fenotipa (in njihove spremembe) med proizvodnjo in diferenciacijo teh matičnih celic.Countstar Rigel ima tudi prednost pri pridobivanju dodatnih morfoloških informacij, ki jih zagotavljajo posnetki trajnega svetlega polja in fluorescenčnih posnetkov med celotnim procesom spremljanja kakovosti celic.Countstar Rigel ponuja hitro, sofisticirano in zanesljivo metodo za nadzor kakovosti matičnih celic.
Materiali in metode:
Mezenhimske matične celice, pridobljene iz maščobe (AdMSC), je podaril profesor Nianmin Qi, raztopina za barvanje AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002).Protitelo: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSC so gojili v 37 ℃, 5 % CO2 vlažnem inkubatorju.Pred uporabo prebavite s tripsinom.
Postopek barvanja CD markerja je bil uporabljen kot priročnik za protitelesa.
Zaznavanje CD markerjev s Countstar Rigel:
1. Postopek nanašanja barve signala je bil ustvarjen z nastavitvijo kanala PE na sliko PE fluorescence.
2. Iz vsake komore so bila zajeta 3 polja.
3. Po zaključku slikanja in začetne analize je bila s programsko opremo FCS nastavljena nastavitev praga (log gate) za pozitivno in negativno transfekcijo.
Kontrola kakovosti matičnih celic
Naslednja slika (slika 1) prikazuje postopek zdravljenje z matičnimi celicami .
Slika 1: Postopek zdravljenja z matičnimi celicami
Rezultati:
Določanje koncentracije, sposobnosti preživetja, premera in agregacije AdMSC.
Sposobnost preživetja AdMSC je bila določena z AO/PI. Postopek dvobarvnega nanašanja je bil ustvarjen z nastavitvijo zelenega kanala in rdečega kanala na sliko AO in PI fluorescence, plus svetlo polje.Primeri slik so bili prikazani na sliki 2.
Slika 2. Slike pred transportom in po transportu AdMSC.A. Pred prevozom;prikazana je reprezentativna slika.B. Po prevozu;prikazana je reprezentativna slika.
Izvedljivost AdMSC-jev se je drastično spremenila po transportu v primerjavi s pred transportom.Preživetje pred transportom je bilo 92 %, po transportu pa se je zmanjšalo na 71 %.Rezultat je bil prikazan na sliki 3.
Slika 3. Rezultati sposobnosti preživetja AdMSC (pred transportom in po transportu)
Premer in agregacijo je določil tudi Countstar Rigel.Premer AdMSC-jev se je drastično spremenil po transportu v primerjavi s pred transportom.Premer pred transportom je bil 19 µm, vendar se je po transportu povečal na 21 µm.Agregacija pred transportom je bila 20 %, vendar se je po prevozu povečala na 25 %.Iz slik, ki jih je posnel Countstar Rigel, se je fenotip AdMSC po transportu drastično spremenil.Rezultati so bili prikazani na sliki 4.
Slika 4: Premer in rezultati združevanja.O: Reprezentativne slike AdMSC-jev, fenotip AdMSC-jev so se po transportu drastično spremenili.B: Agregacija pred transportom je bila 20 %, vendar se je po prevozu povečala na 25 %.C: Premer pred transportom je bil 19 µm, vendar se je po transportu povečal na 21 µm.
Določite imunofenotip AdMSC po Countstar Rigel
Imunofenotip AdMSC je določil Countstar Rigel, AdMSC so bili inkubirani z različnimi protitelesi (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Postopek nanašanja barve signala je bil ustvarjen z nastavitvijo zelenega kanala za sliko PE fluorescence, plus svetlo polje.Referenčna segmentacija slike svetlega polja je bila uporabljena kot maska za vzorčenje PE fluorescenčnega signala.Prikazani so bili rezultati CD105 (slika 5).
Slika 5: CD105 rezultate AdMSC je določil Countstar Rigel.O: Kvantitativna analiza pozitivnega odstotka CD105 v različnih vzorcih s programsko opremo FCS express 5 plus.B: Visokokakovostne slike zagotavljajo dodatne morfološke informacije.C: Preverjeni rezultati s sličicami vsake posamezne celice so programska orodja FCS razdelila celice v različne skupine glede na njihovo različno ekspresijo beljakovin.
Drugi rezultati protiteles so bili prikazani na sliki 6
Slika 6: A: Reprezentativna slika ASC s tipično vretenasto morfologijo.Posneto z mikroskopom OLYMPUS.Originalna povečava, (10x).B: Adipogeno diferenciacijo ASC-jev dokazuje obarvanje z rutenijevo rdečo barvo, ki kaže področja mineralizacije.Posneto z mikroskopom OLYMPUS.Originalna povečava (10x).C: Countstar FL karakterizacija ASC.
povzetek:
Countstar FL lahko spremlja koncentracijo, sposobnost preživetja in značilnosti fenotipa (in njihove spremembe) med proizvodnjo in diferenciacijo teh matičnih celic.FCS express zagotavlja funkcijo za pregled vsake signalne celice, potrditev podatkov prek slike.Uporabnik je lahko tudi samozavesten za izvedbo naslednjih poskusov na podlagi rezultatov Countstar Rigel.Countstar Rigel ponuja hitro, sofisticirano in zanesljivo metodo za nadzor kakovosti matičnih celic.
