O sela mononuclear toto peripheral (PBMCs) e masani ona faʻaogaina e vavae ese mai le toto atoa e ala i le centrifugation gradient density.O na sela e aofia ai lymphocytes (sel T, sela B, sela NK) ma monocytes, e masani ona faʻaaogaina i le vaega o immunology, cell therapy, faʻamaʻi pipisi ma le atinaʻeina o tui.O le mata'ituina ma le au'ili'ili o le fa'aogaina ma le fa'atumauina o le PBMC e taua tele mo fale su'esu'e, su'esu'ega fa'asaienisi fa'afoma'i ma le gaosiga o sela puipuia.
Ata 1. Tu'u'ese le PBMC mai le toto fou fa'atasi ai ma le fa'a'ese'esega o le Density gradient centrifugation
AOPI Dual-fluoresces faitau o le ituaiga suʻega e faʻaaogaina mo le suʻeina o le faʻaogaina o le sela ma le mafai.O le vaifofo o le tu'ufa'atasiga o le moli acridine (le lanu lanumeamata-fluorescent nucleic acid stain) ma le propidium iodide (le mumu-fluorescent nucleic acid stain).O le Propidium iodide (PI) o se vali e le aofia ai le membrane e na'o le ulu atu i sela e iai ni pa'u fa'afefete, a'o moli acridine e mafai ona ofi uma sela i totonu o se faitau aofa'i.A iai uma vali e lua i totonu o le nucleus, o le propidium iodide e mafua ai le faʻaitiitia o le moli moli acridine e ala i le faʻaliliuina o le malosi o le resonance (FRET).O le i'uga, o sela fa'anumeraina o lo'o i ai i'a ga'o e pisipisia ai le lanumeamata fa'alelei ma faitaulia o lo'o ola, a'o sela fa'anumeraina e fa'afefeteina e na'o le pisia o le mumu felanulanua'i ma e faitaulia ua mate pe a fa'aogaina le Countstar® FL system.O mea e le'i fa'anu'u pei o sela mumu toto, platelets ma otaota e le fa'amumu ma e le amana'ia e le Countstar® FL software.
Fa'ata'ita'iga Fa'ata'ita'iga:
1. Faʻafefe le faʻataʻitaʻiga PBMC i 5 faʻasalalauga eseese ma le PBS;
2. Faʻaopoopo le 12μl AO / PI solution i le 12μl sample, faʻafefiloi malie ma le paipa;
3. Tusi le paluga 20µl i totonu o le potu fa'ase'e;
4. Fa'atagaina sela e nofo i totonu o le potu mo le 1 minute;
5. Iniseti le fa'ase'e i totonu o le meafaigaluega Countstar FL;
6. Filifili le su'ega "AO/PI Viability", ona su'e lea e Countstar FL.
Lapata'iga: O le AO ma le PI ose fa'ama'i pipisi.E fautuaina le tagata fa'afoe e fai mea e puipui ai le tagata lava ia (PPE) ina ia 'alofia le pa'i sa'o ma le pa'u ma mata.
I'uga:
1.Bright Field ma Fluorescence ata o le PBMC
O le vali AO ma le PI e pisia uma ai le DNA i totonu o le sela o sela.O lea la, Platelets, sela mumu toto, po'o otaota feavea'i e le mafai ona a'afia ai le fa'atonuga o le PBMC ma le taunu'uga ola.O sela ola, sela mate ma otaota e mafai ona faigofie ona iloa i luga o ata na gaosia e Countstar FL (Ata 1).
Ata 2. Fa'aa'oa'oga Fa'aola ma ata Fulu o le PBMC
2. Concentration ma Viability o le PBMC
O faʻataʻitaʻiga PBMC na faʻafefeteina i le 2, 4, 8 ma le 16 taimi ma le PBS, ona faʻapipiʻi lea o na faʻataʻitaʻiga i se paluga AO / PI vali ma suʻesuʻeina e Countstar FL.O le taunuuga o le faʻatonuga ma le faʻaogaina o le PBMC o loʻo faʻaalia i lalo o le ata:
