Unugyada mononuclear-ka ee dhiigga ku wareegsan (PBMCs) ayaa inta badan lagu farsameeyaa si looga sooco dhiigga oo dhan iyadoo la adeegsanayo centrifugation gradient cufnaanta.Unugyadaasi waxay ka kooban yihiin lymphocytes (unugyada T, unugyada B, unugyada NK) iyo monocytes, oo caadi ahaan loo isticmaalo berrinka immunology, daaweynta unugyada, cudurrada faafa iyo horumarinta tallaalka.Kormeerka iyo falanqaynta ku-meel-gaadhka iyo xoojinta PBMC waxay muhiim u tahay shaybaarrada bukaan-socodka, cilmi-baarista sayniska caafimaadka aasaasiga ah iyo soo-saarka unugyada difaaca.
Jaantuska 1. PBMC ka go'doomay dhiig cusub oo leh cufnaanta centrifugation
AOPI Dual-fluoresces tirinta waa nooca qiimaynta ee loo isticmaalo ogaanshaha fiirsiga unugga iyo jiritaanka.Xalku waa isku darka orange acridine (cagaaran-fluorescent nucleic acid wasakh) iyo propidium iodide (casaanka-fluorescent nucleic acid wasakh).Propidium iodide (PI) waa dheeha ka saarida xuubka kaas oo gala unugyada leh xuub jaban, halka orange acridine uu awood u leeyahay inuu galo dhammaan unugyada dadweynaha.Marka labada midabba ay ku jiraan xudunta, propidium iodide waxay keentaa hoos u dhaca fluorescence acridine orange by fluorescence resonance energy transfer (FRET).Natiijo ahaan, unugyo nukleed ah oo xuub-ku-jiraan ah ayaa wasakheeya cagaar dhalaalaya waxaana loo tiriyaa inay nool yihiin, halka unugyada nukleed ee xuubka la jabsaday ay wasakheeyaan guduudan fluorescent waxaana lagu tiriyaa inay dhinteen marka la isticmaalayo nidaamka Countstar® FL.Walxaha aan Nukliyeerka ahayn sida unugyada dhiigga cas, platelets iyo burburku ma soo baxaan oo waxaa iska indhatiray barnaamijka Countstar® FL.
Habka Tijaabada:
1.Ku dar shaybaarka PBMC ee 5 xajmiyada kala duwan ee PBS;
2.Ku dar 12µl AO/PI muunad 12µl muunad, si tartiib ah ugu qasan pipette;
3. Ku sawir 20µl isku dhafka qolka;
4. U ogolow unugyadu inay ku degaan qolka ku dhawaad 1 daqiiqo;
5.Cayayaan duleelka Countstar FL aalada;
6. Dooro qiimaynta "AO/PI Viability", ka dibna tijaabi Countstar FL.
Digniin: AO iyo PI waa kansarka suurtagalka ah.Waxaa lagu talinayaa in hawlwadeenku xidho qalabka ilaalinta shakhsi ahaaneed (PPE) si uu uga fogaado in si toos ah maqaarka iyo indhaha u taabto.
Natiijo:
1.Bright Field iyo Sawirada Fluorescence ee PBMC
dheeha AO iyo PI labaduba waa wasakh DNA ku jira xudunta unugyada unugyada.Sidaa darteed, Platelets, unugyada dhiigga cas, ama qashinka gacanta ma awoodaan inay saameeyaan PBMC-yada diiradda iyo natiijada suurtagalka ah.Unugyada noolaha, unugyada dhintay iyo burburka si fudud ayaa loo kala saari karaa iyadoo lagu salaynayo sawirada ay soo saartay Countstar FL (Jaantuska 1).
Jaantuska 2. Sawirada Goobta Iftiinka iyo Dhallaanka ee PBMC
2.Diirada iyo Waxtarka PBMC
Muunadaha PBMC waxaa lagu milmay 2, 4, 8 iyo 16 iyadoo la adeegsanayo PBS, ka dibna shaybaarkaas waxaa lagu daray dheeha AO/PI waxaana u falanqeeyay Countstar FL siday u kala horreeyaan.Natiijooyinka ka-fiirsashada iyo jiritaanka PBMC waxaa lagu muujiyey jaantuska hoose:
