Цоунтстар систем комбинује цитометар слике и бројач ћелија у један инструмент на столу.Овај компактни и аутоматизовани систем за снимање ћелија заснован на апликацији пружа свеобухватно решење за истраживање ћелија рака, укључујући бројање ћелија, одрживост (АО/ПИ, трипан плаво), апоптозу (анексин В-ФИТЦ/ПИ), ћелије циклус (ПИ) и ГФП/РФП трансфекција.
Апстрактан
Рак је један од главних узрока смрти широм света, а развој нових метода лечења рака је од великог значаја.Ћелија рака је основни предмет истраживања рака, из ћелије рака треба процијенити различите информације.Овој области истраживања потребна је брза, поуздана, једноставна и детаљна анализа ћелија.Цоунтстар систем пружа једноставну платформу решења за анализу ћелија рака.
Проучите апоптозу ћелија рака од Цоунтстар Ригел
Тестови апоптозе се рутински користе у многим лабораторијама у различите сврхе, од процене здравља ћелијских култура до процене токсичности панела једињења.
Тест апоптозе је тип који се користи за одређивање процента апоптозе ћелија методом бојења Анексином В-ФИТЦ/ПИ.Анексин В се везује за фосфатидилсерин (ПС) са ћелијом ране апоптозе или ћелијом некрозе.ПИ улази само у некротичне / апоптотичке ћелије у веома касној фази.(Слика 1)
А: Рана апоптоза Анексин В (+), ПИ (-)
Б: Касна апоптоза Анексин В (+), ПИ (+)
Слика 1: Увећани детаљи слика Цоунтстар Ригел (5к увећање) од 293 ћелије, третиране Анексином В ФИТЦ и ПИ
Анализа ћелијског циклуса ћелије рака
Ћелијски циклус или циклус ћелијске деобе је низ догађаја који се дешавају у ћелији који доводе до њене деобе и умножавања њене ДНК (репликација ДНК) да би се произвеле две ћерке ћелије.У ћелијама са језгром, као и код еукариота, ћелијски циклус је такође подељен на три периода: интерфазу, митотичку (М) фазу и цитокинезу.Пропидијум јодид (ПИ) је боја за нуклеарно бојење која се често користи за мерење ћелијског циклуса.Пошто боја не може да уђе у живе ћелије, ћелије се фиксирају етанолом пре бојења.Све ћелије су тада обојене.Ћелије које се припремају за поделу ће садржати све веће количине ДНК и показивати пропорционално повећану флуоресценцију.Разлике у интензитету флуоресценције се користе за одређивање процента ћелија у свакој фази ћелијског циклуса.Цоунтстар може да сними слику и резултати ће бити приказани у ФЦС екпресс софтверу.(слика 2)
Слика 2: МЦФ-7 (А) и 293Т (Б) су обојени комплетом за детекцију ћелијског циклуса са ПИ, резултате је одредио Цоунтстар Ригел и анализирали ФЦС екпрессом.
Одређивање одрживости и ГФП трансфекције у ћелији
Током биопроцеса, ГФП се често користи за спајање са рекомбинантним протеином као индикатором.Одредите да ГФП флуоресцентна може одражавати експресију циљног протеина.Цоунтстар Ригел нуди брз и једноставан тест за тестирање ГФП трансфекције као и одрживости.Ћелије су обојене пропидијум јодидом (ПИ) и Хоецхст 33342 да би се дефинисала популација мртвих ћелија и укупна ћелијска популација.Цоунтстар Ригел нуди брзу, квантитативну методу за процену ефикасности и одрживости ГФП експресије у исто време.(Слика 4)
Слика 4: Ћелије су лоциране коришћењем Хоецхст 33342 (плаво) и проценат ћелија које експримирају ГФП (зелено) може се лако одредити.Неживе ћелије су обојене пропидијум јодидом (ПИ; црвено).
Виабилност и број ћелија
АО/ПИ Двоструко флуоресцентно бројање је тип теста који се користи за детекцију ћелијске концентрације, виталности.Подијељен је на бројање ћелијских линија и примарно бројање ћелија према различитим типовима ћелија.Раствор садржи комбинацију зелено-флуоресцентне боје нуклеинске киселине, акридин наранџе и црвене флуоресцентне боје нуклеинске киселине, пропидијум јодида.Пропидијум јодид је боја за искључивање мембране која улази само у ћелије са угроженим мембранама, док акридин наранџаста продире у све ћелије у популацији.Када су обе боје присутне у језгру, пропидијум јодид изазива смањење флуоресценције акридин наранџасте боје преносом енергије флуоресцентне резонанце (ФРЕТ).Као резултат тога, ћелије са језгром са нетакнутим мембранама боје флуоресцентно зелено и рачунају се као живе, док ћелије са језгром са угроженим мембранама боје само флуоресцентно црвено и рачунају се као мртве када се користи Цоунтстар Ригел систем.Материјали без језгре као што су црвена крвна зрнца, тромбоцити и остаци не флуоресцирају и игноришу их софтвер Цоунтстар Ригел.(Слика 5)
Слика 5: Цоунтстар је оптимизовао метод двоструке флуоресценције за једноставно, тачно одређивање концентрације и одрживости ПБМЦ.Узорци обојени АО/ПИ могу се анализирати са Цоунстар Ригелом
