Анализа леукоцита у пуној крви је рутински тест у клиничкој лабораторији или банци крви.Концентрација и одрживост леукоцита су витални индекс контроле квалитета складиштења крви.Осим леукоцита, пуна крв садржи велики број тромбоцита, црвених крвних зрнаца или ћелијских остатака, што онемогућава анализу пуне крви директно под микроскопом или бројачем ћелија са светлим пољем.Конвенционалне методе за бројање белих крвних зрнаца укључују процес лизе еритроцита, који је дуготрајан.
АОПИ Дуал-флуоресцент цоунтинг је тип теста који се користи за откривање концентрације и одрживости ћелија.Решење је комбинација акридин наранџе (зелена флуоресцентна боја нуклеинске киселине) и пропидијум јодида (црвена флуоресцентна боја нуклеинске киселине).Пропидијум јодид (ПИ) је боја за искључивање мембране која улази само у ћелије са угроженим мембранама, док акридин наранџаста може да продре у све ћелије у популацији.Када су обе боје присутне у језгру, пропидијум јодид изазива смањење флуоресценције акридин наранџасте боје преносом енергије флуоресцентне резонанце (ФРЕТ).Као резултат тога, ћелије са језгром са нетакнутим мембранама боје се флуоресцентно зеленом бојом и рачунају се као живе, док ћелије са једром са угроженим мембранама боје само флуоресцентно црвено и рачунају се као мртве када се користи Цоунтстар® Ригел систем.
Цоунтстар Ригел је идеално решење за многе сложене тестове карактеризације популације ћелија, омогућавајући брзу анализу белих крвних зрнаца у пуној крви.
Експериментални поступак:
1. Узмите 20 µл узорка крви и разблажите узорак у 180 µл ПБС-а.
2.Додајте 12 µл АО/ПИ раствора у 12 µл узорка, нежно помешајте пипетом;
3. Увуците 20 µл смеше у предметно стакло;
4. Дозволите ћелијама да се слегну у комори око 1 минут;
5.Убаците клизач у инструмент Цоунтстар ФЛ;
6. Изаберите тест „АО/ПИ Виабилити”, а затим унесите ИД узорка за овај узорак.
7. Изаберите Однос разблажења, Тип ћелије, кликните на 'Покрени' да бисте започели тест.
Опрез: АО и ПИ су потенцијални канцероген.Препоручује се да оператер носи личну заштитну опрему (ППЕ) како би избегао директан контакт са кожом и очима.
резултат:
1. Бригхт Фиелд Слика пуне крви
На слици са светлом пољем целе крви, ВБЦ нису видљиви међу црвеним крвним зрнцима.(Слика 1)
Слика 1 Слика пуне крви у светлом пољу.
2. Флуоресцентна слика пуне крви
Боје АО и ПИ обојене су ДНК у ћелијском језгру ћелија.Због тога, тромбоцити, црвена крвна зрнца или ћелијски остаци не могу да утичу на концентрацију леукоцита и резултат одрживости.Живи леукоцити (зелени) и мртви леукоцити (црвени) се лако визуализују на флуоресцентним сликама.(слика 2)
Слика 2 Флуоресцентне слике пуне крви.(А).Слика АО канала;(Б) Слика ПИ канала;(Ц) Спојите слике АО и ПИ канала.
3. Концентрација и одрживост леукоцита
Цоунтстар ФЛ софтвер аутоматски броји ћелије три коморне секције и израчунава просечну вредност укупног броја ВБЦ ћелија (1202), концентрације (1,83 к 106 ћелија/мл) и % виталности (82,04%).Слике и подаци пуне крви могу се лако извести као ПДФ, Имаге или Екцел за додатну анализу или архивирање података.
Слика 3 Снимак екрана софтвера Цоунтстар Ригел
