Sistimi ea Countstar e kopanya cytometer ea setšoantšo le k'hamera ea sele hore e be sesebelisoa se le seng sa benche.Sistimi ena e tsamaisoang ke ts'ebeliso, e kopaneng, le e ikemetseng ea ho nahana ka lisele e fana ka tharollo e le 'ngoe bakeng sa lipatlisiso tsa lisele tsa mofetše, ho kenyeletsoa ho bala lisele, ho sebetsa (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), cell cycle (PI), le phetiso ea GFP/RFP.
Kakaretso
Kankere ke e 'ngoe ea lisosa tse kholo tsa lefu lefatšeng ka bophara, 'me nts'etsopele ea mekhoa e mecha ea kalafo ea mofetše e bohlokoa haholo.Kankere cell ke ntho ea mantlha ea lipatlisiso ea mofets'e, tlhahisoleseling e fapaneng e hloka ho hlahlojoa ho tsoa seleng ea mofets'e.Sebaka sena sa lipatlisiso se hloka tlhahlobo e potlakileng, e tšepahalang, e bonolo le e qaqileng ea lisele.Sistimi ea Countstar e fana ka sethala se bonolo sa tharollo bakeng sa tlhahlobo ea lisele tsa mofetše.
Ithute Kankere Cell Apoptosis ka Countstar Rigel
Litlhahlobo tsa Apoptosis li sebelisoa ka tloaelo lilaboratoring tse ngata bakeng sa merero e fapaneng ho tloha ho lekola bophelo bo botle ba lisele ho isa ho lekola chefo ea phanele ea metsoako.
Apoptosis assay ke mofuta o sebelisoang ho fumana liperesente tsa apoptosis tsa lisele ka mokhoa oa ho silafatsa oa Annexin V-FITC/PI.Annexin V e tlama ho phosphatidylserine (PS) ka sele ea pele ea apoptosis kapa sele ea necrosis.PI e kena feela liseleng tsa necrotic/tse morao haholo.(Setšoantšo sa 1)
A: Apoptosis ea pele ea Annexin V (+), PI (-)
B:Apoptosis ea morao-rao Annexin V (+), PI (+)
Setšoantšo sa1: Lintlha tse atolositsoeng tsa litšoantšo tsa Countstar Rigel (5 x magnification) tsa lisele tse 293, tse tšoaroang ka Annexin V FITC le PI.
Cell Cycle Analysis of Cancer Cell
The cell cycle kapa cell-division cycle ke letoto la liketsahalo tse etsahalang ka seleng e lebisang karohanong le phetisong ea DNA ea eona (DNA replication) ho hlahisa lisele tse peli tsa barali.Liseleng tse nang le nucleus, joalo ka eukaryotes, potoloho ea lisele e boetse e arotsoe ka linako tse tharo: interphase, mitotic (M) phase, le cytokinesis.Propidium iodide (PI) ke dae e silafatsang ea nyutlelie e sebelisoang khafetsa ho metha potoloho ea lisele.Kaha dae ha e khone ho kena liseleng tse phelang, lisele li kenngoa ka ethanol pele li silafatsa.Ka nako eo lisele tsohle li silafatsoa.Lisele tse itokiselitseng karohano li tla ba le palo e ntseng e eketseha ea DNA le ho bonts'a fluorescence e eketsehileng.Liphapang tsa matla a fluorescence li sebelisoa ho fumana hore na liperesente tsa lisele li kae mokhahlelong o mong le o mong oa potoloho ea lisele.Countstar e ka nka setšoantšo mme liphetho li tla hlahisoa ho FCS Express software.(Setšoantšo sa 2)
Setšoantšo sa 2: MCF-7 (A) le 293T (B) li ne li silafalitsoe ke Cell cycle Detection Kit le PI, liphetho li ile tsa khethoa ke Countstar Rigel, 'me tsa hlahlojoa ke FCS express.
Viability le GFP Transfection Determination in Cell
Nakong ea bioprocess, GFP e atisa ho sebelisoa ho kopanya le protheine e kopanetsoeng e le pontšo.Fumana hore na fluorescent ea GFP e ka bonts'a polelo ea protheine e lebisitsoeng.Countstar Rigel e fana ka tlhahlobo e potlakileng le e bonolo ea ho lekola phetisetso ea GFP hammoho le ho sebetsa.Lisele li ne li silafalitsoe ka Propidium iodide (PI) le Hoechst 33342 ho hlalosa palo ea lisele tse shoeleng le palo eohle ea lisele.Countstar Rigel e fana ka mokhoa o potlakileng, o leka-lekaneng oa ho lekola ts'ebetso le ts'ebetso ea polelo ea GFP ka nako e le 'ngoe.(Setšoantšo sa 4)
Setšoantšo sa 4: Lisele li fumaneha ho sebelisoa Hoechst 33342 (putsoa) 'me peresente ea lisele tse hlahisang GFP (e tala) e ka fumanoa habonolo.Lisele tse sa pheleng li silafatsoa ke propidium iodide (PI; khubelu).
Viability le Cell Count
Ho bala AO/PI Dual-fluoresces counting ke mofuta oa assay o sebelisetsoang ho bona hore na lisele li sebetsa joang.E arotsoe ka palo ea lisele le palo ea lisele tsa mantlha ho latela mefuta e fapaneng ea lisele.Tharollo e na le motsoako oa letheba le tala-fluorescent nucleic acid, acridine orange, le letheba le khubelu la nucleic acid, propidium iodide.Propidium iodide ke dae e sa kenyelletsoeng lera e kenang feela liseleng tse nang le li-membrane tse senyehileng ha acridine orange e kenella liseleng tsohle ho baahi.Ha lidae ka bobeli li le teng khubung, propidium iodide e baka phokotso ea acridine orange fluorescence ka fluorescence resonance energy transfer (FRET).Ka lebaka leo, lisele tse nang le li-nucleated tse nang le li-membrane tse sa tsitsang li senya botala ba fluorescent 'me li baloa li phela, athe lisele tsa nucleated tse nang le li-membrane tse senyehileng li senya bofubelu ba fluorescent feela' me li nkoa li shoele ha li sebelisa tsamaiso ea Countstar Rigel.Lintho tse se nang nucleated joalo ka lisele tse khubelu tsa mali, liplatelete le maloanlahla ha li na fluoresce mme li hlokomolohuoa ke software ea Countstar Rigel.(Setšoantšo sa 5)
Setšoantšo sa 5: Countstar e ntlafalitse mokhoa oa ho silafatsa ha li-fluorescence tse peli bakeng sa boikemisetso bo bonolo, bo nepahetseng ba ho tsepamisa maikutlo le ho sebetsa ha PBMC.Mehlala e silafalitsoeng ka AO/PI e ka hlahlojoa le Counstar Rigel
