Kakaretso: Mesenchymal stem cell ke karoloana ea lisele tsa "pluripotent stem" tse ka arohanngoang le mesoderm.Ka mekhoa ea bona ea ho inchafatsa le ho fapana ka litsela tse ngata, ba na le monyetla o moholo oa liphekolo tse fapaneng tsa bongaka.Lisele tsa stem tsa Mesenchymal li na le phenotype e ikhethang ea 'mele ea ho itšireletsa mafung le matla a taolo ea ho itšireletsa mafung.Ka hona, lisele tsa mesenchymal stem li se li ntse li sebelisoa haholo ho fetisetsoa ha lisele tsa stem, boenjiniere ba lisele le ho fetisetsa litho tsa 'mele.Ntle le lits'ebetso tsena, li sebelisoa e le sesebelisoa se nepahetseng ho boenjineri ba 'mele e le lisele tsa peo letotong la liteko tsa mantlha le tsa bongaka.Ho fihlela joale, ha ho na mokhoa o amoheloang ka bophara le mokhoa o tloaelehileng oa taolo ea boleng ba lisele tsa mesenchymal stem.Countstar Rigel e khona ho beha leihlo litšoaneleho tsa mahloriso, ts'ebetso le phenotype (le liphetoho tsa tsona) nakong ea tlhahiso le karohano ea lisele tsena tsa stem.Countstar Rigel e boetse e na le monyetla oa ho fumana leseli la tlatsetso la morphological, le fanoeng ke sebaka se sa feleng sa khanya le lirekoto tsa litšoantšo tse thehiloeng ho fluorescence nakong ea ts'ebetso eohle ea ho lekola boleng ba lisele.Countstar Rigel e fana ka mokhoa o potlakileng, o tsoetseng pele, le o tšepahalang bakeng sa taolo ea boleng ba lisele tsa stem.
Lisebelisoa le mekhoa:
Lisele tsa stem tsa mesenchymal tse tsoang ho Adipose-derived mesenchymal stem cell (AdMSCs) li filoe limpho ke Moprofesa Nianmin Qi, AO/PI staining solution (Shanghai RuiYu, CF002).Sesole sa 'mele: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
Li-AdMSC li entsoe ka 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Hlakola ka trypsin pele u e sebelisa.
Ts'ebetso ea ho silafatsa matšoao a CD e ile ea lateloa e le bukana ea antibody.
Ho fumana letšoao la CD ka Countstar Rigel:
1. Ts'ebetso ea kopo ea mebala ea matšoao e entsoe ka ho beha mocha oa PE setšoantšong sa PE fluorescence.
2. Ho ile ha nkoa masimo a 3 phaposing e ’ngoe le e ’ngoe.
3. Ka mor'a hore litšoantšo le tlhahlobo ea pele li phethoe, sebaka sa monyako (log gate) bakeng sa phetisetso e ntle le e mpe e behiloe ke software ea FCS.
Taolo ea boleng ba stem cell
Setšoantšo se latelang (Setšoantšo sa 1) se bontša mokhoa oa ho phekolo ea lisele tsa stem .
Setšoantšo sa 1: Mokhoa oa phekolo ea stem cell
Liphetho:
Ho etsa qeto ea ho tsepamisa maikutlo, ho sebetsa, bophara, le ho bokellana ha li-AdMSC.
Ho sebetsa ha li-AdMSC ho ile ha khethoa ke AO/PI, Mokhoa oa kopo oa mebala e 'meli o entsoe ka ho beha mocha o Motala le mocha o Mofubelu ho etsa setšoantšo sa AO le PI fluorescence, hammoho le tšimo e khanyang.Litšoantšo tsa mohlala li bontšitsoe setšoantšong sa 2.
Setšoantšo sa 2. Litšoantšo tsa pele ho lipalangoang le ka mor'a lipalangoang tsa AdMSC.A. Pele ho lipalangoang;ho bontšoa setšoantšo sa moemeli.B. Ka mor'a lipalangoang;ho bontšoa setšoantšo sa moemeli.
Ts'ebetso ea li-AdMSC e fetohile haholo kamora lipalangoang ha e bapisoa le pele ho lipalangoang.Ts'ebetso ea pele ho lipalangoang e ne e le 92%, empa e theohetse ho 71% kamora lipalangoang.Sephetho se bontšitsoe setšoantšong sa 3.
Setšoantšo sa 3. Liphetho tsa ts'ebetso ea li-AdMSC (Pele ho lipalangoang le ka mor'a lipalangoang)
Bophara le ho kopanya li ne li boetse li khethoa ke Countstar Rigel.Bophara ba li-AdMSC bo fetotsoe haholo kamora lipalangoang ha bo bapisoa le pele ho lipalangoang.Bophara pele ho lipalangoang e ne e le 19µm, empa e ile ea nyolohela ho 21µm ka mor'a lipalangoang.Kakaretso ea pele ho lipalangoang e ne e le 20%, empa e nyolohetse ho 25% ka mor'a lipalangoang.Ho tsoa litšoantšong tse nkiloeng ke Countstar Rigel, phenotype ea AdMSC e fetotsoe haholo ka mor'a lipalangoang.Liphetho li bontšitsoe setšoantšong sa 4.
Setšoantšo sa 4: Liphetho tsa bophara le ho kopanya.A: Litšoantšo tse emetseng tsa li-AdMSC, phenotype ea AdMSC li ile tsa fetoloa haholo ka mor'a lipalangoang.B: Kakaretso ea pele ho lipalangoang e ne e le 20%, empa e nyolohetse ho 25% ka mor'a lipalangoang.C: Bophara pele ho lipalangoang e ne e le 19µm, empa e ile ea nyolohela ho 21µm ka mor'a lipalangoang.
Fumana mofuta oa immunophenotype oa AdMSC ka Countstar Rigel
The immunophenotype ea AdMSCs e ile ea khethoa ke Countstar Rigel, AdMSCs e ne e kenngoa ka li-antibody tse fapaneng ka ho latellana (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Ts'ebetso ea kopo ea mebala ea matšoao e entsoe ka ho beha mocha o Motala ho etsa setšoantšo sa PE fluorescence, hammoho le lebala le khanyang.Karolo ea litšupiso tsa litšoantšo tse khanyang e sebelisitsoe joalo ka maske ho etsa sampole lets'oao la PE fluorescence.Liphetho tsa CD105 li bontšitsoe (Setšoantšo sa 5).
Setšoantšo sa 5: Liphetho tsa CD105 tsa AdMSC li khethiloe ke Countstar Rigel.A: Tlhahlobo ea palo ea liperesente tse ntle tsa CD105 lisampoleng tse fapaneng ka FCS express 5 plus software.B: Litšoantšo tsa boleng bo holimo li fana ka lintlha tse eketsehileng tsa morphological.C: Liphetho tse netefalitsoeng ka li-thumbnails tsa sele e 'ngoe le e' ngoe, lisebelisoa tsa software tsa FCS li arola lisele ka lihlopha tse fapaneng ho latela liprotheine tsa tsona tse fapaneng.
Liphetho tse ling tsa li-antibodies li bontšitsoe setšoantšong sa 6
Setšoantšo sa 6: A: Setšoantšo sa moemeli oa li-ASC tse nang le morphology e tloaelehileng ea sebopeho sa spindle.E hapuoe ke microscope ea OLYMPUS.Kholiso ea mantlha, (10x).B: Phapang ea Adipogenic ea ASCs e pakoa ke Ruthenium Red staining e bontšang libaka tsa mineralization.E hapuoe ke microscope ea OLYMPUS.Kholiso ea mantlha (10x).C: Sebopeho sa Countstar FL sa ASCs.
Kakaretso:
The Countstar FL e khona ho beha leihlo litšoaneleho tsa mahloriso, ts'ebetso le phenotype (le liphetoho tsa tsona) nakong ea tlhahiso le karohano ea lisele tsena tsa stem.FCS Express e fana ka ts'ebetso ho hlahloba sele e 'ngoe le e' ngoe ea matšoao, ho netefatsa lintlha ka setšoantšo.Mosebelisi a ka ba le ts'epo ea ho etsa liteko tse latelang tse ipapisitseng le liphetho tsa Countstar Rigel.Countstar Rigel e fana ka mokhoa o potlakileng, o tsoetseng pele, le o tšepahalang bakeng sa taolo ea boleng ba lisele tsa stem.
