Sistem Countstar ngagabungkeun cytometer gambar sareng counter sél kana hiji instrumen bangku luhur.Sistem pencitraan sél anu didorong ku aplikasi, kompak, sareng otomatis ieu nyayogikeun solusi sadaya-dina-hiji pikeun panalungtikan sél kanker, kalebet cacah sél, viability (AO / PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC / PI), sél. siklus (PI), sarta GFP / RFP transfection.
Abstrak
Kanker mangrupikeun salah sahiji panyabab utama maotna di dunya, sareng pamekaran metode pengobatan kanker énggal penting pisan.Sél kanker mangrupikeun objek panalungtikan dasar kanker, sagala rupa inpormasi kedah dievaluasi tina sél kanker.Wewengkon panalungtikan ieu peryogi analisis sél anu gancang, dipercaya, sederhana sareng rinci.Sistim Countstar nyadiakeun platform solusi basajan pikeun analisis sél kanker.
Diajar Apoptosis Sél Kangker ku Countstar Rigel
Assays apoptosis rutin dipaké di loba laboratorium pikeun rupa-rupa kaperluan ti assessing kaséhatan kultur sél nepi ka evaluating karacunan panel sanyawa.
Assay apoptosis mangrupikeun jinis anu dianggo pikeun nangtukeun persentase apoptosis sél ku metode pewarnaan Annexin V-FITC/PI.Annexin V ngabeungkeut fosfatidilserin (PS) kalawan sél apoptosis mimiti atawa sél necrosis.PI ngan asup kana sél apoptosis tahap necrotic / pisan telat.(Gambar 1)
A: apoptosis awal Annexin V (+), PI (-)
B: Apoptosis telat Annexin V (+), PI (+)
Gambar 1: Rincian ngagedekeun gambar Countstar Rigel (5 x pembesaran) 293 sél, dirawat ku Annexin V FITC sareng PI
Analisis Siklus Sél sél Kangker
Siklus sél atawa daur sél-divisi nyaéta runtuyan kajadian anu lumangsung dina sél nu ngarah ka division sarta duplikasi DNA na (réplikasi DNA) pikeun ngahasilkeun dua sél putri.Dina sél nu boga inti, saperti dina eukariota, siklus sél ogé dibagi kana tilu période: interfase, fase mitosis (M), jeung sitokinesis.Propidium iodide (PI) nyaéta pewarna pewarna nuklir anu sering dianggo pikeun ngukur siklus sél.Kusabab pewarna teu tiasa asup kana sél hirup, sél dibenerkeun ku étanol sateuacan diwarnaan.Sadaya sél teras diwarnaan.Sél anu nyiapkeun pikeun ngabagi bakal ngandung jumlah DNA anu ningkat sareng nunjukkeun fluoresensi anu ningkat sacara proporsional.Béda dina inténsitas fluoresensi dipaké pikeun nangtukeun persentase sél dina unggal fase siklus sél.Countstar tiasa nyandak gambar sareng hasilna bakal ditingalikeun dina parangkat lunak ekspres FCS.(Gambar 2)
Angka 2: MCF-7 (A) sareng 293T (B) diwarnaan ku Kit Deteksi siklus sél sareng PI, hasilna ditangtukeun ku Countstar Rigel, sareng dianalisis ku FCS express.
Viability na GFP Transfection Tekad dina sél
Dina prosés bioprosés, GFP sering dianggo pikeun ngahiji sareng protéin rékombinan salaku indikator.Nangtukeun fluoresensi GFP tiasa ngagambarkeun ekspresi protéin target.Countstar Rigel nawiskeun tes anu gancang sareng saderhana pikeun nguji transfeksi GFP ogé viability.Sél diwarnaan ku Propidium iodide (PI) sareng Hoechst 33342 pikeun nangtukeun populasi sél maot sareng total populasi sél.Countstar Rigel nawiskeun metode kuantitatif gancang pikeun ngevaluasi efisiensi ekspresi GFP sareng viability dina waktos anu sami.(Gambar 4)
Gambar 4: Sél anu lokasina maké Hoechst 33342 (biru) jeung persentase GFP nganyatakeun sél (héjo) bisa gampang ditangtukeun.Sél nonviable diwarnaan ku propidium iodide (PI; beureum).
Viability jeung Cell Count
AO / PI Dual-fluoresces cacah teh tipe assay dipaké pikeun detecting konsentrasi sél, viability.Éta dibagi kana cacah garis sél sareng cacah sél primér dumasar kana jinis sél anu béda.Solusina ngandung kombinasi noda asam nukléat héjo-fluoresensi, jeruk acridine, sareng noda asam nukléat redfluoresensi, propidium iodide.Propidium iodide mangrupikeun pewarna pangaluaran mémbran anu ngan ukur asup kana sél anu mémbran anu dikompromi sedengkeun jeruk acridine nembus sadaya sél dina hiji populasi.Nalika duanana pewarna aya dina inti, propidium iodide nyababkeun pangurangan fluoresensi jeruk acridine ku transfer énergi résonansi fluoresensi (FRET).Hasilna, sél nukléasi jeung mémbran gembleng ngawarnaan héjo fluoresensi sarta diitung salaku hirup, sedengkeun sél nukléasi jeung mémbran kompromi ngan ngawarnaan beureum fluoresensi sarta diitung salaku maot nalika ngagunakeun sistem Countstar Rigel.Bahan non-inti sapertos sél getih beureum, trombosit sareng lebu henteu fluoresce sareng teu dipaliré ku parangkat lunak Countstar Rigel.(Gambar 5)
angka 5: Countstar geus dioptimalkeun metoda dual-fluoresensi staining pikeun basajan, tekad akurat konsentrasi PBMC sarta viability.Sampel anu diwarnaan ku AO / PI tiasa dianalisis sareng Counstar Rigel
