Abstrak: Sél stém mesenchymal mangrupakeun sawaréh ti sél stém pluripotent nu bisa diisolasi tina mesoderm.Kalayan pembaharuan réplikasi diri sareng ciri diferensiasi multi-arah, aranjeunna gaduh poténsi anu luhur pikeun sababaraha terapi ubar.Sél stém mesenchymal gaduh fénotip imun unik sareng kamampuan régulasi imun.Ku alatan éta, sél stém mesenchymal geus loba dipaké dina cangkok sél stem, rékayasa jaringan, jeung cangkok organ.Sareng Saluareun aplikasi ieu, aranjeunna dianggo salaku alat idéal dina rékayasa jaringan salaku sél seeder dina séri percobaan panalungtikan dasar sareng klinis.Nepi ka ayeuna, teu aya metode anu ditarima sacara lega sareng standar pikeun kadali kualitas sél stém mesenchymal.Countstar Rigel tiasa ngawas konséntrasi, viability, sareng ciri fenotipe (sareng parobahanana) salami produksi sareng diferensiasi sél stém ieu.The Countstar Rigel ogé boga kaunggulan pikeun meunangkeun informasi morfologis tambahan, disadiakeun ku brightfield permanén tur rekaman gambar dumasar-fluoresensi salila sakabéh prosés ngawaskeun kualitas sél.Countstar Rigel nawiskeun metode anu gancang, canggih, sareng dipercaya pikeun kadali kualitas sél stém.
Bahan sareng métodeu:
Sél stem mesenchymal turunan adiposa (AdMSCs) anu gifted ku Professor Nianmin Qi, AO / PI staining solusi (Shanghai RuiYu, CF002).Antibodi: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Company).
AdMSCs dibudidayakan dina 37 ℃, 5% CO2 humidified incubator.Nyerna sareng tripsin sateuacan dianggo.
Prosedur pewarnaan spidol CD dituturkeun salaku manual antibodi.
Deteksi pananda CD sareng Countstar Rigel:
1. Prosedur aplikasi sinyal-warna dijieun ku netepkeun saluran pe ka fluoresensi PE gambar.
2. 3 widang direbut ti unggal chamber.
3. Saatos Imaging jeung analisis awal geus réngsé, bangbarung (gerbang log) setelan pikeun transfection positif jeung negatif diatur ku software FCS.
Kontrol kualitas sél indung
Gambar handap (gambar 1) nembongkeun prosedur tina terapi sél indung .
Gambar 1: Prosedur pikeun terapi sél stem
Hasil:
Nangtukeun konsentrasi, viability, diaméter, sareng aggregation of AdMSCs.
The viability of AdMSCs ditangtukeun ku AO / PI, A prosedur aplikasi dual-warna dijieun ku netepkeun channel Héjo sarta channel Beureum kana gambar AO na pi fluoresensi, ditambah widang caang.Gambar conto dipidangkeun dina Gambar 2.
Gambar 2. Gambar sateuacan ngangkut sareng saatos transportasi AdMSCs.A. Sateuacan ngangkut;gambar wawakil ditémbongkeun.B. Sanggeus angkutan;gambar wawakil ditémbongkeun.
Viability of AdMSCs dirobah drastis sanggeus transportasi lamun dibandingkeun jeung saméméh angkutan.Viability saméméh angkutan éta 92%, tapi diréduksi jadi 71% sanggeus angkutan.Hasilna ditémbongkeun dina Gambar 3.
Gambar 3. Hasil viability tina AdMSCs (Saméméh ngangkut jeung sanggeus angkutan)
Diaméter sareng agrégasi ogé ditangtukeun ku Countstar Rigel.Diaméter AdMSC dirobih sacara drastis saatos diangkut upami dibandingkeun sareng sateuacan diangkut.Diaméter saacanna diangkut nyaéta 19µm, tapi ningkat jadi 21µm saatos diangkut.The aggregation tina saméméh angkutan éta 20%, tapi ngaronjat jadi 25% sanggeus angkutan.Tina gambar anu dicandak ku Countstar Rigel, fenotipe AdMSC parantos robih sacara drastis saatos transportasi.Hasilna ditémbongkeun dina Gambar 4.
Gambar 4: Diaméter jeung hasil aggregation.A: Gambar wawakil AdMSCs, phenotype of AdMSCs robah drastis sanggeus transportasi.B: The aggregation saméméh angkutan éta 20%, tapi ngaronjat jadi 25% sanggeus angkutan.C: Diaméter sateuacan diangkut nyaéta 19µm, tapi ningkat jadi 21µm saatos diangkut.
Nangtukeun immunophenotype AdMSCs ku Countstar Rigel
The immunophenotype of AdMSCs ditangtukeun ku Countstar Rigel, AdMSCs anu incubated kalawan antibodi béda mungguh (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR).Prosedur aplikasi warna sinyal dijieun ku netepkeun saluran Héjo ka fluoresensi PE gambar, ditambah widang caang.Segmentasi rujukan gambar lapangan anu terang diterapkeun salaku topéng pikeun sampel sinyal fluoresensi PE.Hasil tina CD105 ditémbongkeun (Gambar 5).
Angka 5: hasil CD105 AdMSCs ditangtukeun ku Countstar Rigel.A: Analisis kuantitatif tina persentase positif CD105 dina sampel béda ku software FCS express 5 tambah.B: Gambar kualitas luhur nyayogikeun inpormasi morfologis tambahan.C: Hasil anu divalidasi ku gambar leutik unggal sél, parangkat lunak FCS ngabagi sél kana grup anu béda-béda dumasar kana ekspresi protéinna anu béda-béda.
Hasil antibodi sanésna ditingalikeun dina Gbr 6
Gambar 6: A: Gambar wawakil ASCs kalawan morfologi ngawangun spindle has.Ditéwak ku mikroskop OLYMPUS.Ngagedekeun aslina, (10x).B: diferensiasi adipogenic of ASCs dibuktikeun ku Ruthenium Beureum staining némbongkeun wewengkon mineralisasi.Ditéwak ku mikroskop OLYMPUS.Ngagedekeun aslina (10x).C: Countstar FL characterization of ASCs.
Ringkesan:
The Countstar FL bisa ngawas konsentrasi, viability, sarta ciri phenotype (jeung parobahanana) salila produksi jeung diferensiasi sél stém ieu.FCS express nyadiakeun fungsi pikeun marios unggal sél sinyal, sangkan méré konfirmasi data ngaliwatan gambar.Pamaké ogé tiasa gaduh kapercayaan pikeun ngalaksanakeun percobaan salajengna dumasar kana hasil Countstar Rigel.Countstar Rigel nawiskeun metode anu gancang, canggih, sareng dipercaya pikeun kadali kualitas sél stém.
