Countstar-systemet kombinerar bildcytometern och cellräknaren till ett enda bänkinstrument.Detta applikationsdrivna, kompakta och automatiserade cellavbildningssystem ger en allt-i-ett-lösning för cancercellsforskning, inklusive cellräkning, livsduglighet (AO/PI, trypanblått), apoptos (Annexin V-FITC/PI), cell cykel (PI) och GFP/RFP-transfektion.
Abstrakt
Cancer är en av de främsta dödsorsakerna i världen och utvecklingen av nya cancerbehandlingsmetoder är av stor betydelse.Cancercell är cancercellens grundforskningsobjekt, olika uppgifter behöver utvärderas från cancercellen.Detta forskningsområde behöver snabb, pålitlig, enkel och detaljerad cellanalys.Countstar-systemet tillhandahåller en enkel lösningsplattform för analys av cancerceller.
Studera cancercellapoptos av Countstar Rigel
Apoptosanalyser används rutinmässigt i många laboratorier för olika ändamål från att bedöma hälsan hos cellkulturer till att utvärdera toxiciteten hos en panel av föreningar.
Apoptosanalys är en typ som används för att bestämma apoptosprocenten av celler med Annexin V-FITC/PI-färgningsmetoden.Annexin V binder till fosfatidylserin (PS) med tidig apoptoscell eller nekroscell.PI går endast in i nekrotiska/mycket sent skede apoptotiska celler.(Figur 1)
A: tidig apoptos Annexin V (+), PI (-)
B: Sen apoptos Annexin V (+), PI (+)
Figur 1: Förstorade detaljer av Countstar Rigel-bilder (5 x förstoring) av 293 celler, behandlade med Annexin V FITC och PI
Cellcykelanalys av cancerceller
Cellcykeln eller celldelningscykeln är den serie av händelser som äger rum i en cell som leder till dess delning och duplicering av dess DNA (DNA-replikation) för att producera två dotterceller.I celler med en kärna, som i eukaryoter, är cellcykeln också indelad i tre perioder: interfas, mitotisk (M) fas och cytokines.Propidiumjodid (PI) är ett nukleärt färgningsfärgämne som ofta används för att mäta cellcykeln.Eftersom färgen inte kan komma in i levande celler fixeras cellerna med etanol före färgning.Alla celler färgas sedan.Celler som förbereder sig för delning kommer att innehålla ökande mängder DNA och uppvisa proportionellt ökad fluorescens.Skillnader i fluorescensintensitet används för att bestämma procentandelen celler i varje fas av cellcykeln.Countstar kan fånga bilden och resultaten kommer att visas i FCS express-programvaran.(Figur 2)
Figur 2: MCF-7 (A) och 293T (B) färgades med cellcykeldetektionskit med PI, resultaten bestämdes med Countstar Rigel och analyserades med FCS express.
Viabilitet och GFP-transfektionsbestämning i cell
Under bioprocessen används GFP ofta för att smälta samman med rekombinant protein som en indikator.Bestäm GFP fluorescerande kan reflekterade målproteinuttrycket.Countstar Rigel erbjuder en snabb och enkel analys för att testa GFP-transfektion samt livskraft.Celler färgades med Propidiumjodid (PI) och Hoechst 33342 för att definiera den döda cellpopulationen och den totala cellpopulationen.Countstar Rigel erbjuder en snabb, kvantitativ metod för att utvärdera GFP-uttryckseffektivitet och livsduglighet på samma gång.(Figur 4)
Figur 4: Celler lokaliseras med Hoechst 33342 (blå) och andelen GFP-uttryckande celler (grön) kan lätt bestämmas.Icke viabla celler färgas med propidiumjodid (PI; röd).
Viabilitet och cellantal
AO/PI Dubbelfluorescensräkning är den analystyp som används för att detektera cellkoncentration, livsduglighet.Den delas in i cellinjeräkning och primär cellräkning enligt olika celltyper.Lösningen innehåller en kombination av den grönfluorescerande nukleinsyrafärgen, akridinorange, och den rödfluorescerande nukleinsyrafärgen, propidiumjodid.Propidiumjodid är ett membranexklusionsfärgämne som endast kommer in i celler med skadade membran medan akridin orange penetrerar alla celler i en population.När båda färgämnena är närvarande i kärnan orsakar propidiumjodid en minskning av akridin-orange fluorescens genom fluorescensresonansenergiöverföring (FRET).Som ett resultat färgas kärnförsedda celler med intakta membran fluorescerande grönt och räknas som levande, medan kärnförsedda celler med komprometterade membran endast färgas fluorescerande rött och räknas som döda när Countstar Rigel-systemet används.Icke-kärnbildat material som röda blodkroppar, blodplättar och skräp fluorescerar inte och ignoreras av programvaran Countstar Rigel.(Figur 5)
Figur 5: Countstar har optimerat en dubbelfluorescensfärgningsmetod för enkel, exakt bestämning av PBMC-koncentration och viabilitet.Prover färgade med AO/PI kan analyseras med Counstar Rigel
