AOPI Dual-fluoresces counting är den analystyp som används för att detektera cellkoncentration och livsduglighet.Lösningen är en kombination av akridin orange (den grönfluorescerande nukleinsyrafärgen) och propidiumjodid (den rödfluorescerande nukleinsyrafärgen).Propidiumjodid (PI) är ett membranexklusionsfärgämne som endast kommer in i celler med skadade membran, medan akridin orange kan penetrera alla celler i en population.När båda färgämnena är närvarande i kärnan orsakar propidiumjodid en minskning av akridin-orange fluorescens genom fluorescensresonansenergiöverföring (FRET).Som ett resultat färgas kärnförsedda celler med intakta membran fluorescerande grönt och räknas som levande, medan kärnförsedda celler med komprometterade membran endast färgas fluorescerande rött och räknas som döda när Countstar® FL-systemet används.Material som inte innehåller kärnor som röda blodkroppar, blodplättar och skräp fluorescerar inte och ignoreras av programvaran Countstar® FL.
Processen för stamcellsterapi
Figur 4 Övervakning av viabilitet och cellantal av mesenkymala stamceller (MSC) för användning i cellterapier.
Bestäm MSC-viabilitet med AO/PI och Trypan Blue-analys
Figur 2. A. Bild av MSC färgad med AO/PI och Trypan Blue;2. Jämförelse av AO/PI och Trypanblått resultat före och efter transport.
Cellens brytningsindex förändras, Trypan Blue-färgning var inte så uppenbar, det är svårt att avgöra livsdugligheten efter transport.Medan dubbelfärgad fluorescens tillåter färgning av levande och döda kärnförsedda celler, genererar exakta livskraftsresultat även i närvaro av skräp, blodplättar och röda blodkroppar.
