Experimentellt protokoll
Cytotoxiciteten i % beräknas med ekvationen nedan.
Cytotoxicitet % = (levande antal kontroller – levande antal behandlade) / levande antal kontroller × 100
Genom att märka måltumörcellerna med icke-toxisk, icke-radioaktivt kalcein AM eller transfektera med GFP, kan vi övervaka dödandet av tumörcellerna av CAR-T-celler.Medan levande målcancerceller kommer att märkas av en grön calcein AM eller GFP, kan de döda cellerna inte behålla det gröna färgämnet.Hoechst 33342 används för att färga alla celler (både T-celler och tumörceller), alternativt kan måltumörceller färgas med membranbundet kalcein AM, PI används för att färga de döda cellerna (både T-celler och tumörceller).Denna färgningsstrategi möjliggör särskiljning av olika celler.
E: T-kvotsberoende cytotoxicitet av K562
Exemplet Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescerande bilder är K562-målcellerna vid t = 3 timmar
De resulterande fluorescerande bilderna visade en ökning av Hoechst+CFSE+PI+-målceller när E:T-förhållandet ökade
