Mfumo wa Countstar unachanganya sitomita ya picha na kihesabu cha seli kuwa kifaa kimoja cha juu cha benchi.Mfumo huu wa upigaji picha wa seli unaoendeshwa na maombi, kompakt, na otomatiki hutoa suluhisho la kila moja kwa utafiti wa seli za saratani, pamoja na kuhesabu seli, uwezekano (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), seli. mzunguko (PI), na uhamisho wa GFP/RFP.
Muhtasari
Saratani ni mojawapo ya sababu kuu za kifo duniani kote, na maendeleo ya mbinu mpya za matibabu ya saratani ni muhimu sana.Seli ya saratani ni kitu cha msingi cha utafiti wa saratani, habari mbalimbali zinahitaji kutathminiwa kutoka kwa seli ya saratani.Eneo hili la utafiti linahitaji uchambuzi wa haraka, wa kuaminika, rahisi na wa kina wa seli.Mfumo wa Countstar hutoa jukwaa la suluhisho rahisi kwa uchambuzi wa seli za saratani.
Soma Apoptosis ya Seli ya Saratani na Countstar Rigel
Vipimo vya hali ya hewa ya apoptosis hutumiwa mara kwa mara katika maabara nyingi kwa madhumuni mbalimbali kutoka kwa kutathmini afya ya tamaduni za seli hadi kutathmini sumu ya jopo la misombo.
Kipimo cha Apoptosis ni aina inayotumiwa kubainisha asilimia ya apoptosis ya seli kwa njia ya uwekaji madoa ya Annexin V-FITC/PI.Kiambatisho V hufungamana na phosphatidylserine (PS) yenye seli ya awali ya apoptosis au seli ya nekrosisi.PI huingia pekee kwenye seli za necrotic/hatua ya marehemu sana.(Kielelezo 1)
A: Apoptosis ya mapema Annexin V (+), PI (-)
B:Apoptosis ya marehemu Annexin V (+), PI (+)
Kielelezo 1: Maelezo yaliyopanuliwa ya picha za Countstar Rigel (5 x ukuzaji) za seli 293, zilizotibiwa na Annexin V FITC na PI.
Uchambuzi wa Mzunguko wa Kiini wa Seli ya Saratani
Mzunguko wa seli au mzunguko wa mgawanyiko wa seli ni mfululizo wa matukio ambayo hufanyika katika seli inayopelekea mgawanyiko wake na kurudiwa kwa DNA yake (DNA replication) ili kuzalisha seli mbili binti.Katika seli zilizo na kiini, kama katika yukariyoti, mzunguko wa seli pia umegawanywa katika vipindi vitatu: interphase, awamu ya mitotic (M), na cytokinesis.Propidium iodidi (PI) ni rangi ya nyuklia inayotia rangi ambayo hutumiwa mara kwa mara kupima mzunguko wa seli.Kwa sababu rangi haiwezi kuingia kwenye seli hai, seli huwekwa na ethanol kabla ya kuchafua.Kisha seli zote hutiwa rangi.Seli zinazojiandaa kwa mgawanyiko zitakuwa na viwango vinavyoongezeka vya DNA na kuonyesha mwanga wa umeme ulioongezeka.Tofauti katika ukubwa wa fluorescence hutumiwa kuamua asilimia ya seli katika kila awamu ya mzunguko wa seli.Countstar inaweza kupiga picha na matokeo yataonyeshwa katika programu ya FCS Express.(Kielelezo 2)
Kielelezo cha 2: MCF-7 (A) na 293T (B) zilitiwa doa na Kitengo cha Kugundua mzunguko wa seli chenye PI, matokeo yalibainishwa na Countstar Rigel, na kuchambuliwa na FCS express.
Uwezekano na Uamuzi wa Uhamisho wa GFP katika Kiini
Wakati wa mchakato wa kibayolojia, GFP mara nyingi hutumiwa kuunganisha na protini recombinant kama kiashirio.Amua fluorescent ya GFP inaweza kuakisi usemi wa protini lengwa.Countstar Rigel inatoa jaribio la haraka na rahisi la kujaribu uambukizaji wa GFP na vile vile uwezekano.Seli zilitiwa doa na Propidium iodide (PI) na Hoechst 33342 ili kufafanua idadi ya seli zilizokufa na jumla ya seli.Countstar Rigel inatoa mbinu ya haraka na ya kiasi ya kutathmini ufanisi na uwezekano wa kujieleza wa GFP kwa wakati mmoja.(Kielelezo 4)
Kielelezo 4: Seli zinapatikana kwa kutumia Hoechst 33342 (bluu) na asilimia ya seli zinazoonyesha za GFP (kijani) inaweza kubainishwa kwa urahisi.Seli zisizoweza kuepukika zimechafuliwa na iodidi ya propidium (PI; nyekundu).
Uwezo na Hesabu ya Seli
Uhesabuji wa AO/PI-fluoresces mbili ni aina ya kipimo kinachotumiwa kutambua ukolezi wa seli, uwezo wake wa kufanya kazi.Iligawanywa katika kuhesabu mstari wa seli na kuhesabu seli msingi kulingana na aina tofauti za seli.Suluhisho lina mchanganyiko wa doa ya kijani-fluorescent ya asidi ya nucleic, akridine machungwa, na doa ya asidi ya nucleic nyekundu, propidium iodidi.Propidium iodidi ni rangi ya kutengwa kwa utando ambayo huingia tu kwenye seli zilizo na utando ulioathiriwa huku chungwa akridine hupenya seli zote katika idadi ya watu.Wakati rangi zote mbili zipo kwenye kiini, iodidi ya propidium husababisha kupunguzwa kwa fluorescence ya chungwa ya akridine kwa uhamishaji wa nishati ya mwanga wa fluorescence (FRET).Kwa hivyo, seli zilizo na nuklea zilizo na utando mzima huchafua kijani kibichi na huhesabiwa kuwa hai, ilhali seli zilizo na nuklea zilizo na utando ulioathiriwa huchafua tu nyekundu ya flora na huhesabiwa kuwa zimekufa wakati wa kutumia mfumo wa Countstar Rigel.Nyenzo zisizo na nyuklia kama vile chembechembe nyekundu za damu, chembe chembe za damu na uchafu hazipungui na hupuuzwa na programu ya Countstar Rigel.(Kielelezo 5)
Kielelezo cha 5: Countstar imeboresha mbinu ya uwekaji madoa ya fluorescence kwa uthibitisho rahisi na sahihi wa mkusanyiko na uwezekano wa PBMC.Sampuli zilizo na AO/PI zinaweza kuchanganuliwa kwa kutumia Counstar Rigel
