Seli za pembeni za damu ya nyuklia (PBMCs) mara nyingi huchakatwa ili kutenganishwa na damu nzima kwa upenyo wa msongamano wa kupenyeza katikati.Seli hizo zinajumuisha lymphocytes (seli T, seli za B, seli za NK) na monocytes, ambazo hutumiwa kwa kawaida katika uwanja wa immunology, tiba ya seli, magonjwa ya kuambukiza na maendeleo ya chanjo.Kufuatilia na kuchambua uwezekano na mkusanyiko wa PBMC ni muhimu kwa maabara ya kliniki, utafiti wa kimsingi wa sayansi ya matibabu na utengenezaji wa seli za kinga.
Kielelezo cha 1. PBMC Iliyotengwa kutoka kwa damu safi na upenyezaji wa gradient ya Density
Hesabu ya AOPI-fluoresces mbili ni aina ya kipimo kinachotumiwa kutambua ukolezi wa seli na uwezo wake wa kufanya kazi.Suluhisho ni mchanganyiko wa akridine chungwa (doa ya kijani-fluorescent ya asidi ya nucleic) na iodidi ya propidium (doa la asidi ya nukleiki nyekundu-fluorescent).Propidium iodide (PI) ni rangi ya kutengwa kwa utando ambayo huingia tu kwenye seli zilizo na utando ulioathiriwa, huku chungwa la akridine linaweza kupenya seli zote katika idadi ya watu.Wakati rangi zote mbili zipo kwenye kiini, iodidi ya propidium husababisha kupunguzwa kwa fluorescence ya chungwa ya akridine kwa uhamishaji wa nishati ya mwanga wa fluorescence (FRET).Kwa hivyo, seli zilizo na nuklea zilizo na utando mzima huchafua kijani kibichi na huhesabiwa kuwa hai, ilhali seli zilizo na nuklea zilizo na utando ulioathiriwa huchafua tu nyekundu ya flora na huhesabiwa kuwa zimekufa wakati wa kutumia mfumo wa Countstar® FL.Nyenzo zisizo na nyuklia kama vile chembechembe nyekundu za damu, chembe chembe za damu na vifusi havicheki na hupuuzwa na programu ya Countstar® FL.
Utaratibu wa Majaribio:
1. Punguza sampuli ya PBMC katika viwango 5 tofauti na PBS;
2.Ongeza suluhisho la 12µl AO/PI kwenye sampuli ya 12µl, iliyochanganywa kwa upole na pipette;
3.Chora mchanganyiko wa 20µl kwenye slaidi ya chumba;
4.Ruhusu seli zitulie kwenye chumba kwa takriban dakika 1;
5.Weka slaidi kwenye chombo cha Countstar FL;
6.Chagua jaribio la "AO/PI Viability", kisha ufanye majaribio na Countstar FL.
Tahadhari: AO na PI ni kansa inayoweza kutokea.Inapendekezwa kuwa opereta avae vifaa vya kinga ya kibinafsi (PPE) ili kuzuia kugusa ngozi na macho moja kwa moja.
Matokeo:
1.Taswira za Uga Bright na Fluorescence za PBMC
Rangi ya AO na PI zote ni madoa ya DNA kwenye kiini cha seli.Kwa hivyo, Platelets, seli nyekundu za damu, au uchafu wa seli haziwezi kuathiri mkusanyiko wa PBMCs na matokeo ya uwezekano.Seli zilizo hai, seli zilizokufa na uchafu zinaweza kutofautishwa kwa urahisi kulingana na picha zinazozalishwa na Countstar FL (Mchoro 1).
Kielelezo 2.Picha za Sehemu Mkali na Fluorescence za PBMC
2.Kuzingatia na Uwepo wa PBMC
Sampuli za PBMC zilipunguzwa mara 2, 4, 8 na 16 kwa kutumia PBS, kisha sampuli hizo ziliwekwa ndani ya mchanganyiko wa rangi ya AO/PI na kuchambuliwa na Countstar FL mtawalia.Matokeo ya mkusanyiko na uwezekano wa PBMC yanaonyeshwa kama takwimu hapa chini:
