புற்றுநோய் உயிரணு ஆராய்ச்சியில் கவுண்ட்ஸ்டாரின் பயன்பாடுகள்

கவுண்ட்ஸ்டார் அமைப்பு பட சைட்டோமீட்டர் மற்றும் செல் கவுண்டரை ஒரு பெஞ்ச்-டாப் கருவியாக இணைக்கிறது.இந்த பயன்பாடு-உந்துதல், கச்சிதமான மற்றும் தானியங்கு செல் இமேஜிங் அமைப்பு, செல் எண்ணிக்கை, நம்பகத்தன்மை (AO/PI, ட்ரிபான் நீலம்), அப்போப்டொசிஸ் (அனெக்ஸின் V-FITC/PI), செல் உள்ளிட்ட புற்றுநோய் உயிரணு ஆராய்ச்சிக்கான ஆல்-இன்-ஒன் தீர்வை வழங்குகிறது. சுழற்சி (PI), மற்றும் GFP/RFP இடமாற்றம்.

சுருக்கம்

உலகளவில் இறப்புக்கான முக்கிய காரணங்களில் ஒன்று புற்றுநோயாகும், மேலும் புதிய புற்றுநோய் சிகிச்சை முறைகளின் வளர்ச்சி மிகவும் முக்கியத்துவம் வாய்ந்தது.புற்றுநோய் உயிரணு புற்றுநோயின் அடிப்படை ஆராய்ச்சிப் பொருளாகும், புற்றுநோய் உயிரணுவிலிருந்து பல்வேறு தகவல்கள் மதிப்பீடு செய்யப்பட வேண்டும்.இந்த ஆராய்ச்சி பகுதிக்கு விரைவான, நம்பகமான, எளிமையான மற்றும் விரிவான செல் பகுப்பாய்வு தேவை.கவுண்ட்ஸ்டார் அமைப்பு புற்றுநோய் உயிரணு பகுப்பாய்வுக்கான எளிய தீர்வு தளத்தை வழங்குகிறது.

கவுண்ட்ஸ்டார் ரிகல் மூலம் புற்றுநோய் செல் அப்போப்டொசிஸ் ஆய்வு

உயிரணு கலாச்சாரங்களின் ஆரோக்கியத்தை மதிப்பிடுவது முதல் சேர்மங்களின் குழுவின் நச்சுத்தன்மையை மதிப்பிடுவது வரை பல்வேறு நோக்கங்களுக்காக பல ஆய்வகங்களில் அப்போப்டொசிஸ் மதிப்பீடுகள் வழக்கமாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
அப்போப்டொசிஸ் மதிப்பீடு என்பது Annexin V-FITC/PI ஸ்டைனிங் முறை மூலம் உயிரணுக்களின் அப்போப்டொசிஸ் சதவீதத்தை தீர்மானிக்கப் பயன்படும் ஒரு வகை.அனெக்சின் V, ஆரம்பகால அப்போப்டொசிஸ் செல் அல்லது நெக்ரோசிஸ் செல் உடன் பாஸ்பாடிடைல்செரினுடன் (PS) பிணைக்கிறது.PI நெக்ரோடிக்/மிகவும் தாமதமான அப்போப்டொடிக் செல்களுக்குள் மட்டுமே நுழைகிறது.(படம் 1)

ப: ஆரம்பகால அப்போப்டொசிஸ் அனெக்ஸின் V (+), PI (-)

பி: தாமதமான அப்போப்டொசிஸ் அனெக்ஸின் வி (+), பிஐ (+)

படம்1: Annexin V FITC மற்றும் PI உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட 293 கலங்களின் கவுண்ட்ஸ்டார் ரிகல் படங்களின் (5 x உருப்பெருக்கம்) விரிவாக்கப்பட்ட விவரங்கள்

புற்றுநோய் உயிரணுவின் செல் சுழற்சி பகுப்பாய்வு

செல் சுழற்சி அல்லது செல்-பிரிவு சுழற்சி என்பது ஒரு கலத்தில் நடக்கும் நிகழ்வுகளின் தொடராகும், இது அதன் பிரிவு மற்றும் அதன் டிஎன்ஏ (டிஎன்ஏ ரெப்ளிகேஷன்) இரண்டு மகள் செல்களை உருவாக்க வழிவகுக்கிறது.யூகாரியோட்களைப் போலவே, அணுக்கரு உள்ள உயிரணுக்களில், செல் சுழற்சியும் மூன்று காலகட்டங்களாகப் பிரிக்கப்படுகிறது: இடைநிலை, மைட்டோடிக் (எம்) கட்டம் மற்றும் சைட்டோகினேசிஸ்.ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (PI) என்பது அணுக் கறை படிந்த சாயமாகும், இது செல் சுழற்சியை அளவிட அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படுகிறது.சாயம் உயிரணுக்களுக்குள் நுழைய முடியாது என்பதால், கலங்கள் கறைபடுவதற்கு முன்பு எத்தனாலுடன் சரி செய்யப்படுகின்றன.பின்னர் செல்கள் அனைத்தும் கறை படிந்திருக்கும்.பிரிவுக்குத் தயாராகும் செல்கள் டிஎன்ஏவை அதிகரிக்கும் அளவுகளைக் கொண்டிருக்கும் மற்றும் விகிதாச்சாரத்தில் அதிகரித்த ஒளிரும் தன்மையைக் காண்பிக்கும்.செல் சுழற்சியின் ஒவ்வொரு கட்டத்திலும் உள்ள செல்களின் சதவீதத்தை தீர்மானிக்க ஒளிரும் தீவிரத்தில் உள்ள வேறுபாடுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.கவுண்ட்ஸ்டார் படத்தைப் பிடிக்க முடியும் மற்றும் முடிவுகள் FCS எக்ஸ்பிரஸ் மென்பொருளில் காட்டப்படும்.(படம் 2)

படம் 2: MCF-7 (A) மற்றும் 293T (B) ஆகியவை PI உடன் செல் சுழற்சி கண்டறிதல் கிட் மூலம் கறை படிந்தன, முடிவுகள் கவுண்ட்ஸ்டார் ரிகல் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்டது மற்றும் FCS எக்ஸ்பிரஸ் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.

செல்லில் நம்பகத்தன்மை மற்றும் GFP இடமாற்றம் தீர்மானித்தல்

உயிர்ச் செயல்பாட்டின் போது, ​​GFP ஆனது ஒரு குறிகாட்டியாக மறுசீரமைப்பு புரதத்துடன் இணைக்கப் பயன்படுகிறது.GFP ஃப்ளோரசன்ட் இலக்கு புரத வெளிப்பாட்டை பிரதிபலிக்கும் என்பதை தீர்மானிக்கவும்.GFP இடமாற்றம் மற்றும் நம்பகத்தன்மையை பரிசோதிப்பதற்கான வேகமான மற்றும் எளிமையான மதிப்பீட்டை Countstar Rigel வழங்குகிறது.இறந்த செல் மக்கள்தொகை மற்றும் மொத்த செல் மக்கள்தொகையை வரையறுக்க செல்கள் ப்ராபிடியம் அயோடைடு (PI) மற்றும் Hoechst 33342 உடன் படிந்துள்ளன.Countstar Rigel GFP வெளிப்பாடு திறன் மற்றும் ஒரே நேரத்தில் நம்பகத்தன்மையை மதிப்பிடுவதற்கான விரைவான, அளவு முறையை வழங்குகிறது.(படம் 4)

படம் 4: செல்கள் Hoechst 33342 (நீலம்) ஐப் பயன்படுத்தி அமைந்துள்ளன மற்றும் GFP வெளிப்படுத்தும் கலங்களின் (பச்சை) சதவீதத்தை எளிதில் தீர்மானிக்க முடியும்.சாத்தியமற்ற செல் ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (PI; சிவப்பு) மூலம் கறைபட்டுள்ளது.

நம்பகத்தன்மை மற்றும் செல் எண்ணிக்கை

AO/PI டூயல்-ஃப்ளோரசெஸ் எண்ணிக்கை என்பது செல் செறிவு, நம்பகத்தன்மை ஆகியவற்றைக் கண்டறியப் பயன்படுத்தப்படும் மதிப்பீட்டு வகையாகும்.இது வெவ்வேறு செல் வகைக்கு ஏற்ப செல் வரி எண்ணுதல் மற்றும் முதன்மை செல் எண்ணிக்கை என பிரிக்கப்பட்டுள்ளது.கரைசலில் பச்சை-ஃப்ளோரசன்ட் நியூக்ளிக் அமிலக் கறை, அக்ரிடின் ஆரஞ்சு மற்றும் ரெட்ஃப்ளோரசன்ட் நியூக்ளிக் அமிலக் கறை, ப்ராபிடியம் அயோடைடு ஆகியவற்றின் கலவை உள்ளது.ப்ரோபிடியம் அயோடைடு என்பது ஒரு சவ்வு விலக்கு சாயமாகும், இது சமரசம் செய்யப்பட்ட சவ்வுகளைக் கொண்ட செல்களுக்குள் மட்டுமே நுழைகிறது, அதே நேரத்தில் அக்ரிடின் ஆரஞ்சு மக்கள் தொகையில் உள்ள அனைத்து செல்களிலும் ஊடுருவுகிறது.இரண்டு சாயங்களும் கருவில் இருக்கும்போது, ​​ப்ரோபிடியம் அயோடைடு, ஃப்ளோரசன்ஸ் ரெசோனன்ஸ் எனர்ஜி டிரான்ஸ்ஃபர் (FRET) மூலம் அக்ரிடின் ஆரஞ்சு ஃப்ளோரசன்ஸைக் குறைக்கிறது.இதன் விளைவாக, அப்படியே சவ்வுகளைக் கொண்ட நியூக்ளியேட்டட் செல்கள் ஃப்ளோரசன்ட் பச்சை நிறத்தைக் கறைபடுத்துகின்றன, மேலும் அவை உயிருள்ளவையாகக் கணக்கிடப்படுகின்றன, அதேசமயம் சமரசம் செய்யப்பட்ட சவ்வுகளைக் கொண்ட நியூக்ளியேட்டட் செல்கள் ஃப்ளோரசன்ட் சிவப்பு நிறத்தை மட்டுமே கறைபடுத்துகின்றன மற்றும் கவுண்ட்ஸ்டார் ரிகல் அமைப்பைப் பயன்படுத்தும் போது இறந்ததாகக் கணக்கிடப்படுகின்றன.இரத்த சிவப்பணுக்கள், பிளேட்லெட்டுகள் மற்றும் குப்பைகள் போன்ற அணுக்கரு அல்லாத பொருட்கள் ஒளிர்வதில்லை மற்றும் கவுண்ட்ஸ்டார் ரிகல் மென்பொருளால் புறக்கணிக்கப்படுகின்றன.(படம் 5)

படம் 5: Countstar ஆனது PBMC செறிவு மற்றும் நம்பகத்தன்மையை எளிமையான, துல்லியமான தீர்மானத்திற்காக இரட்டை-ஃப்ளோரசன்ஸ் ஸ்டைனிங் முறையை மேம்படுத்தியுள்ளது.AO/PI உடன் படிந்த மாதிரிகளை Counstar Rigel மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யலாம்