புற இரத்த மோனோநியூக்ளியர் செல்கள் (பிபிஎம்சி) பெரும்பாலும் அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கு மூலம் முழு இரத்தத்திலிருந்து பிரிக்க செயலாக்கப்படுகின்றன.அந்த செல்கள் லிம்போசைட்டுகள் (டி செல்கள், பி செல்கள், என்கே செல்கள்) மற்றும் மோனோசைட்டுகள் ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்கின்றன, பொதுவாக நோயெதிர்ப்பு, செல் சிகிச்சை, தொற்று நோய் மற்றும் தடுப்பூசி உருவாக்கம் ஆகியவற்றில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.மருத்துவ ஆய்வகங்கள், அடிப்படை மருத்துவ அறிவியல் ஆராய்ச்சி மற்றும் நோயெதிர்ப்பு உயிரணு உற்பத்திக்கு பிபிஎம்சியின் நம்பகத்தன்மை மற்றும் செறிவைக் கண்காணித்தல் மற்றும் பகுப்பாய்வு செய்வது மிகவும் முக்கியமானது.
படம் 1. அடர்த்தி சாய்வு மையவிலக்கத்துடன் புதிய இரத்தத்திலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பிபிஎம்சி
AOPI டூயல்-ஃப்ளோரசெஸ் எண்ணிக்கை என்பது செல் செறிவு மற்றும் நம்பகத்தன்மையைக் கண்டறியப் பயன்படுத்தப்படும் மதிப்பீட்டு வகையாகும்.தீர்வு அக்ரிடின் ஆரஞ்சு (பச்சை-ஃப்ளோரசன்ட் நியூக்ளிக் அமிலக் கறை) மற்றும் ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (சிவப்பு-ஃப்ளோரசன்ட் நியூக்ளிக் அமிலக் கறை) ஆகியவற்றின் கலவையாகும்.ப்ரோபிடியம் அயோடைடு (PI) என்பது ஒரு சவ்வு விலக்கு சாயமாகும், இது சமரசம் செய்யப்பட்ட சவ்வுகளுடன் மட்டுமே செல்களுக்குள் நுழைகிறது, அதே சமயம் அக்ரிடின் ஆரஞ்சு மக்கள் தொகையில் உள்ள அனைத்து செல்களிலும் ஊடுருவ முடியும்.இரண்டு சாயங்களும் கருவில் இருக்கும்போது, ப்ரோபிடியம் அயோடைடு, ஃப்ளோரசன்ஸ் ரெசோனன்ஸ் எனர்ஜி டிரான்ஸ்ஃபர் (FRET) மூலம் அக்ரிடின் ஆரஞ்சு ஃப்ளோரசன்ஸைக் குறைக்கிறது.இதன் விளைவாக, அப்படியே சவ்வுகளைக் கொண்ட நியூக்ளியேட்டட் செல்கள் ஃப்ளோரசன்ட் பச்சை நிறத்தைக் கறைபடுத்துகின்றன, மேலும் அவை நேரலையாகக் கணக்கிடப்படுகின்றன, அதேசமயம் சமரசம் செய்யப்பட்ட சவ்வுகளைக் கொண்ட நியூக்ளியேட்டட் செல்கள் ஃப்ளோரசன்ட் சிவப்பு நிறத்தை மட்டுமே கறைபடுத்துகின்றன மற்றும் கவுண்ட்ஸ்டார் எஃப்எல் அமைப்பைப் பயன்படுத்தும் போது இறந்ததாகக் கணக்கிடப்படுகிறது.இரத்த சிவப்பணுக்கள், பிளேட்லெட்டுகள் மற்றும் குப்பைகள் போன்ற அணுக்கரு அல்லாத பொருட்கள் ஒளிர்வதில்லை மற்றும் Countstar® FL மென்பொருளால் புறக்கணிக்கப்படுகின்றன.
சோதனை செயல்முறை:
1. PBMC மாதிரியை PBS உடன் 5 வெவ்வேறு செறிவுகளாக நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்;
2. 12µl AO/PI கரைசலை 12µl மாதிரியில் சேர்க்கவும், மெதுவாக பைப்பெட்டுடன் கலக்கவும்;
3.20µl கலவையை அறை ஸ்லைடில் வரையவும்;
4. செல்களை சுமார் 1 நிமிடம் அறையில் குடியேற அனுமதிக்கவும்;
5. கவுண்ட்ஸ்டார் எஃப்எல் கருவியில் ஸ்லைடைப் பூச்சி;
6. "AO/PI வைபிலிட்டி" மதிப்பீட்டைத் தேர்ந்தெடுத்து, பின்னர் Countstar FL மூலம் சோதிக்கவும்.
எச்சரிக்கை: AO மற்றும் PI ஒரு சாத்தியமான புற்றுநோயாகும்.தோல் மற்றும் கண்களுடன் நேரடியாகத் தொடர்பு கொள்வதைத் தவிர்க்க, ஆபரேட்டர் தனிப்பட்ட பாதுகாப்பு உபகரணங்களை (PPE) அணியுமாறு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
விளைவாக:
1.பிபிஎம்சியின் பிரைட் ஃபீல்ட் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் படங்கள்
AO மற்றும் PI சாயம் இரண்டும் உயிரணுக்களின் செல் அணுக்கருவில் உள்ள கறை டிஎன்ஏ ஆகும்.எனவே, பிளேட்லெட்டுகள், இரத்த சிவப்பணுக்கள் அல்லது செல்லுலார் குப்பைகள் பிபிஎம்சிகளின் செறிவு மற்றும் நம்பகத்தன்மை விளைவை பாதிக்காது.கவுண்ட்ஸ்டார் எஃப்எல் (படம் 1) உருவாக்கிய படங்களின் அடிப்படையில் வாழும் செல்கள், இறந்த செல்கள் மற்றும் குப்பைகளை எளிதில் வேறுபடுத்தி அறியலாம்.
படம் 2.பிபிஎம்சியின் பிரைட் ஃபீல்ட் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் படங்கள்
2.பிபிஎம்சியின் செறிவு மற்றும் நம்பகத்தன்மை
பிபிஎம்சி மாதிரிகள் பிபிஎஸ் உடன் 2, 4, 8 மற்றும் 16 முறை நீர்த்தப்பட்டன, பின்னர் அந்த மாதிரிகள் ஏஓ/பிஐ சாய கலவையுடன் அடைகாக்கப்பட்டு முறையே கவுண்ட்ஸ்டார் எஃப்எல் மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.பிபிஎம்சியின் செறிவு மற்றும் நம்பகத்தன்மையின் முடிவு கீழே உள்ள படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளது:
