క్యాన్సర్ కణ పరిశోధనలో కౌంట్‌స్టార్ యొక్క అప్లికేషన్స్

కౌంట్‌స్టార్ సిస్టమ్ ఇమేజ్ సైటోమీటర్ మరియు సెల్ కౌంటర్‌ను ఒకే బెంచ్-టాప్ పరికరంగా మిళితం చేస్తుంది.ఈ అప్లికేషన్-ఆధారిత, కాంపాక్ట్ మరియు ఆటోమేటెడ్ సెల్ ఇమేజింగ్ సిస్టమ్ సెల్ లెక్కింపు, సాధ్యత (AO/PI, ట్రిపాన్ బ్లూ), అపోప్టోసిస్ (Annexin V-FITC/PI), సెల్‌తో సహా క్యాన్సర్ కణ పరిశోధన కోసం ఆల్ ఇన్ వన్ సొల్యూషన్‌ను అందిస్తుంది. చక్రం (PI), మరియు GFP/RFP బదిలీ.

నైరూప్య

ప్రపంచవ్యాప్తంగా మరణాలకు ప్రధాన కారణాలలో క్యాన్సర్ ఒకటి, మరియు కొత్త క్యాన్సర్ చికిత్సా పద్ధతుల అభివృద్ధి చాలా ముఖ్యమైనది.క్యాన్సర్ కణం క్యాన్సర్ యొక్క ప్రాథమిక పరిశోధన వస్తువు, క్యాన్సర్ కణం నుండి వివిధ సమాచారాన్ని విశ్లేషించాలి.ఈ పరిశోధన ప్రాంతానికి వేగవంతమైన, నమ్మదగిన, సరళమైన మరియు వివరణాత్మక సెల్ విశ్లేషణ అవసరం.కౌంట్‌స్టార్ సిస్టమ్ క్యాన్సర్ కణాల విశ్లేషణ కోసం సరళమైన పరిష్కార వేదికను అందిస్తుంది.

కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ ద్వారా క్యాన్సర్ సెల్ అపోప్టోసిస్ అధ్యయనం

కణ సంస్కృతుల ఆరోగ్యాన్ని అంచనా వేయడం నుండి సమ్మేళనాల ప్యానెల్ యొక్క విషాన్ని మూల్యాంకనం చేయడం వరకు వివిధ ప్రయోజనాల కోసం అనేక ప్రయోగశాలలలో అపోప్టోసిస్ పరీక్షలు మామూలుగా ఉపయోగించబడతాయి.
అపోప్టోసిస్ అస్సే అనేది అనెక్సిన్ V-FITC/PI స్టెయినింగ్ పద్ధతి ద్వారా కణాల అపోప్టోసిస్ శాతాన్ని నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించే ఒక రకం.అనెక్సిన్ V ప్రారంభ అపోప్టోసిస్ సెల్ లేదా నెక్రోసిస్ సెల్‌తో ఫాస్ఫాటిడైల్సెరిన్ (PS)తో బంధిస్తుంది.PI నెక్రోటిక్/చాలా చివరి దశ అపోప్టోటిక్ కణాలలోకి మాత్రమే ప్రవేశిస్తుంది.(చిత్రం 1)

జ: ఎర్లీ అపోప్టోసిస్ అనెక్సిన్ V (+), PI (-)

బి: లేట్ అపోప్టోసిస్ అనెక్సిన్ V (+), PI (+)

Figure1: Annexin V FITC మరియు PIతో చికిత్స చేయబడిన 293 కణాల కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ చిత్రాల (5 x మాగ్నిఫికేషన్) యొక్క విస్తారిత వివరాలు

క్యాన్సర్ సెల్ యొక్క సెల్ సైకిల్ విశ్లేషణ

కణ చక్రం లేదా కణ-విభజన చక్రం అనేది ఒక కణంలో జరిగే సంఘటనల శ్రేణి, ఇది రెండు కుమార్తె కణాలను ఉత్పత్తి చేయడానికి దాని విభజన మరియు దాని DNA (DNA రెప్లికేషన్) యొక్క నకిలీకి దారి తీస్తుంది.న్యూక్లియస్ ఉన్న కణాలలో, యూకారియోట్లలో వలె, కణ చక్రం కూడా మూడు కాలాలుగా విభజించబడింది: ఇంటర్‌ఫేస్, మైటోటిక్ (M) దశ మరియు సైటోకినిసిస్.ప్రొపిడియం అయోడైడ్ (PI) అనేది కణ చక్రాన్ని కొలవడానికి తరచుగా ఉపయోగించే న్యూక్లియర్ స్టెయినింగ్ డై.రంగు ప్రత్యక్ష కణాలలోకి ప్రవేశించలేనందున, కణాలు మరకకు ముందు ఇథనాల్‌తో స్థిరపరచబడతాయి.అప్పుడు కణాలన్నీ తడిసినవి.విభజన కోసం సిద్ధమవుతున్న కణాలు పెరుగుతున్న DNA మొత్తాన్ని కలిగి ఉంటాయి మరియు దామాషా ప్రకారం పెరిగిన ఫ్లోరోసెన్స్‌ను ప్రదర్శిస్తాయి.కణ చక్రం యొక్క ప్రతి దశలో కణాల శాతాన్ని నిర్ణయించడానికి ఫ్లోరోసెన్స్ తీవ్రతలో తేడాలు ఉపయోగించబడతాయి.Countstar చిత్రాన్ని క్యాప్చర్ చేయగలదు మరియు FCS ఎక్స్‌ప్రెస్ సాఫ్ట్‌వేర్‌లో ఫలితాలు ప్రదర్శించబడతాయి.(చిత్రం 2)

మూర్తి 2: MCF-7 (A) మరియు 293T (B) PIతో సెల్ సైకిల్ డిటెక్షన్ కిట్‌తో తడిసినవి, ఫలితాలు కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ ద్వారా నిర్ణయించబడ్డాయి మరియు FCS ఎక్స్‌ప్రెస్ ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.

సెల్‌లో సాధ్యత మరియు GFP బదిలీ నిర్ధారణ

బయోప్రాసెస్ సమయంలో, GFP తరచుగా రీకాంబినెంట్ ప్రోటీన్‌తో ఒక సూచికగా ఫ్యూజ్ చేయడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.GFP ఫ్లోరోసెంట్ లక్ష్య ప్రోటీన్ వ్యక్తీకరణను ప్రతిబింబిస్తుందని నిర్ణయించండి.కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ GFP బదిలీని అలాగే సాధ్యతను పరీక్షించడానికి వేగవంతమైన మరియు సరళమైన పరీక్షను అందిస్తుంది.చనిపోయిన కణ జనాభా మరియు మొత్తం సెల్ జనాభాను నిర్వచించడానికి కణాలు ప్రొపిడియం అయోడైడ్ (PI) మరియు హోచ్స్ట్ 33342తో తడిసినవి.కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ అదే సమయంలో GFP వ్యక్తీకరణ సామర్థ్యం మరియు సాధ్యతను అంచనా వేయడానికి శీఘ్ర, పరిమాణాత్మక పద్ధతిని అందిస్తుంది.(చిత్రం 4)

మూర్తి 4: సెల్‌లు Hoechst 33342 (నీలం) ఉపయోగించి ఉన్నాయి మరియు GFP ఎక్స్‌ప్రెస్సింగ్ సెల్‌ల శాతాన్ని (ఆకుపచ్చ) సులభంగా నిర్ణయించవచ్చు.నాన్వియబుల్ సెల్ ప్రొపిడియం అయోడైడ్ (PI; ఎరుపు)తో తడిసినది.

సాధ్యత మరియు సెల్ కౌంట్

AO/PI ద్వంద్వ-ఫ్లోరోసెస్ లెక్కింపు అనేది సెల్ ఏకాగ్రత, సాధ్యతను గుర్తించడానికి ఉపయోగించే పరీక్ష రకం.ఇది వివిధ సెల్ రకం ప్రకారం సెల్ లైన్ లెక్కింపు మరియు ప్రాథమిక సెల్ లెక్కింపుగా విభజించబడింది.ద్రావణంలో గ్రీన్-ఫ్లోరోసెంట్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ స్టెయిన్, అక్రిడిన్ ఆరెంజ్ మరియు రెడ్‌ఫ్లోరోసెంట్ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ స్టెయిన్, ప్రొపిడియం అయోడైడ్ కలయిక ఉంటుంది.ప్రొపిడియం అయోడైడ్ అనేది పొర మినహాయింపు రంగు, ఇది రాజీపడిన పొరలతో కణాలలోకి మాత్రమే ప్రవేశిస్తుంది, అయితే యాక్రిడిన్ ఆరెంజ్ జనాభాలోని అన్ని కణాలలోకి చొచ్చుకుపోతుంది.న్యూక్లియస్‌లో రెండు రంగులు ఉన్నప్పుడు, ప్రొపిడియం అయోడైడ్ ఫ్లోరోసెన్స్ రెసొనెన్స్ ఎనర్జీ ట్రాన్స్‌ఫర్ (FRET) ద్వారా యాక్రిడిన్ ఆరెంజ్ ఫ్లోరోసెన్స్‌లో తగ్గింపును కలిగిస్తుంది.ఫలితంగా, చెక్కుచెదరని పొరలతో కూడిన న్యూక్లియేటెడ్ కణాలు ఫ్లోరోసెంట్ ఆకుపచ్చ రంగులో ఉంటాయి మరియు ప్రత్యక్షంగా లెక్కించబడతాయి, అయితే కాంప్రమైజ్డ్ మెమ్బ్రేన్‌లతో న్యూక్లియేటెడ్ కణాలు ఫ్లోరోసెంట్ ఎరుపు రంగును మాత్రమే మరక చేస్తాయి మరియు కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ సిస్టమ్‌ను ఉపయోగిస్తున్నప్పుడు చనిపోయినట్లు లెక్కించబడతాయి.ఎర్ర రక్త కణాలు, ప్లేట్‌లెట్‌లు మరియు శిధిలాల వంటి న్యూక్లియేటెడ్ కాని పదార్థం ఫ్లోరోస్ చేయదు మరియు కౌంట్‌స్టార్ రిగెల్ సాఫ్ట్‌వేర్ ద్వారా విస్మరించబడుతుంది.(చిత్రం 5)

మూర్తి 5: PBMC ఏకాగ్రత మరియు సాధ్యత యొక్క సరళమైన, ఖచ్చితమైన నిర్ధారణ కోసం కౌంట్‌స్టార్ డ్యూయల్-ఫ్లోరోసెన్స్ స్టెయినింగ్ పద్ధతిని ఆప్టిమైజ్ చేసింది.AO/PIతో తడిసిన నమూనాలను కౌన్‌స్టార్ రిగెల్‌తో విశ్లేషించవచ్చు