ప్రయోగాత్మక ప్రోటోకాల్
సైటోటాక్సిసిటీ % క్రింది సమీకరణం ద్వారా లెక్కించబడుతుంది.
సైటోటాక్సిసిటీ % = (నియంత్రణ యొక్క ప్రత్యక్ష గణనలు – చికిత్స యొక్క ప్రత్యక్ష గణనలు) / నియంత్రణ యొక్క ప్రత్యక్ష గణనలు × 100
టార్గెట్ ట్యూమర్ కణాలను నాన్-టాక్సిక్, నాన్-రేడియోయాక్టివ్ కాల్సిన్ AMతో లేబుల్ చేయడం ద్వారా లేదా GFPతో బదిలీ చేయడం ద్వారా, మేము CAR-T కణాల ద్వారా కణితి కణాలను చంపడాన్ని పర్యవేక్షించవచ్చు.లైవ్ టార్గెట్ క్యాన్సర్ కణాలు ఆకుపచ్చ కాల్సిన్ AM లేదా GFP ద్వారా లేబుల్ చేయబడినప్పటికీ, చనిపోయిన కణాలు ఆకుపచ్చ రంగును నిలుపుకోలేవు.Hoechst 33342 అన్ని కణాలను (T కణాలు మరియు కణితి కణాలు రెండూ) మరక చేయడానికి ఉపయోగించబడుతుంది, ప్రత్యామ్నాయంగా, లక్ష్య కణితి కణాలను మెమ్బ్రేన్ బౌండ్ కాల్సిన్ AMతో మరక చేయవచ్చు, చనిపోయిన కణాలను (T కణాలు మరియు కణితి కణాలు రెండూ) మరక చేయడానికి PI ఉపయోగించబడుతుంది.ఈ మరక వ్యూహం వివిధ కణాల వివక్షను అనుమతిస్తుంది.
E: K562 యొక్క T నిష్పత్తి ఆధారిత సైటోటాక్సిసిటీ
ఉదాహరణ Hoechst 33342, CFSE, PI ఫ్లోరోసెంట్ చిత్రాలు t = 3 గంటల వద్ద K562 లక్ష్య కణాలు
ఫలితంగా ఫ్లోరోసెంట్ చిత్రాలు E: T నిష్పత్తి పెరిగినందున Hoechst+CFSE+PI+ టార్గెట్ సెల్‌లలో పెరుగుదల కనిపించింది
