Системаи Countstar цитометри тасвир ва ҳисобкунаки ҳуҷайраро ба як асбоби болоии боло муттаҳид мекунад.Ин системаи тасвири ҳуҷайраҳои ба барнома асосёфта, паймон ва автоматишуда як ҳалли ҳама дар як барои таҳқиқоти ҳуҷайраҳои саратон, аз ҷумла ҳисобкунии ҳуҷайраҳо, қобилиятнокӣ (AO/PI, трипан кабуд), апоптоз (Annexin V-FITC/PI), ҳуҷайра давра (PI) ва интиқоли GFP/RFP.
Реферат
Саратон яке аз сабабҳои асосии марг дар саросари ҷаҳон аст ва таҳияи усулҳои нави табобати саратон аҳамияти бузург дорад.Ҳуҷайраи саратон объекти асосии тадқиқоти саратон мебошад, иттилооти гуногунро аз ҳуҷайраи саратон арзёбӣ кардан лозим аст.Ин соҳаи тадқиқот ба таҳлили зуд, боэътимод, содда ва муфассали ҳуҷайра ниёз дорад.Системаи Countstar як платформаи ҳалли оддии таҳлили ҳуҷайраҳои саратонро пешниҳод мекунад.
Омӯзиши апоптози ҳуҷайраҳои саратон аз ҷониби Countstar Rigel
Таҳлилҳои апоптоз дар бисёр лабораторияҳо бо мақсадҳои гуногун аз арзёбии саломатии фарҳангҳои ҳуҷайра то арзёбии заҳролудии як гурӯҳи пайвастагиҳо истифода мешаванд.
Таҳлили апоптоз як навъест, ки барои муайян кардани фоизи апоптози ҳуҷайраҳо бо усули рангкунии Annexin V-FITC/PI истифода мешавад.Анексин V ба фосфатидилсерин (PS) бо ҳуҷайраи барвақти апоптоз ё ҳуҷайраи некроз пайваст мешавад.PI танҳо ба ҳуҷайраҳои апоптозии некротикӣ/марҳилаи дертар ворид мешавад.(Расми 1)
A: Апоптози барвақти Анексин V (+), PI (-)
B: Апоптози дер Анексин V (+), PI (+)
Расми 1: Тафсилоти васеъшудаи расмҳои Countstar Rigel (5 x калонкунӣ) аз 293 ҳуҷайра, ки бо Annexin V FITC ва PI коркард шудаанд
Таҳлили сикли ҳуҷайраҳои ҳуҷайраҳои саратон
Силсилаи ҳуҷайра ё давраи тақсими ҳуҷайраҳо як силсила рӯйдодҳое мебошанд, ки дар ҳуҷайра ба тақсимшавӣ ва такроршавии ДНК-и он (репликатсияи ДНК) барои тавлиди ду ҳуҷайраи духтар оварда мерасонанд.Дар ҳуҷайраҳои дорои ядро, мисли эукариотҳо, сикли ҳуҷайра низ ба се давра тақсим мешавад: интерфаза, марҳилаи митозӣ (М) ва ситокинез.Йодид пропидиум (PI) як рангест, ки барои чен кардани давраи ҳуҷайра истифода мешавад.Азбаски ранг ба ҳуҷайраҳои зинда ворид шуда наметавонад, ҳуҷайраҳо пеш аз ранг кардан бо этанол собит карда мешаванд.Пас аз он ҳама ҳуҷайраҳо ранг карда мешаванд.Ҳуҷайраҳое, ки барои тақсимшавӣ омода мешаванд, миқдори афзояндаи ДНК-ро дар бар мегиранд ва флюоресценти мутаносиб зиёдро нишон медиҳанд.Тафовут дар шиддатнокии флуоресцент барои муайян кардани фоизи ҳуҷайраҳо дар ҳар як марҳилаи давраи ҳуҷайра истифода мешавад.Countstar метавонад тасвирро гирад ва натиҷаҳо дар нармафзори экспресси FCS намоиш дода мешаванд.(Расми 2)
Тасвири 2: MCF-7 (A) ва 293T (B) бо маҷмӯаи муайянкунии давраи ҳуҷайра бо PI ранг карда шуданд, натиҷаҳо аз ҷониби Countstar Rigel муайян карда шуданд ва аз ҷониби FCS экспресс таҳлил карда шуданд.
Муайян кардани қобилият ва интиқоли GFP дар ҳуҷайра
Ҳангоми биопроцесс, GFP аксар вақт барои пайвастан бо сафедаи рекомбинантӣ ҳамчун нишондиҳанда истифода мешавад.Муайян кунед, ки флуоресценти GFP метавонад ифодаи сафедаи ҳадафро инъикос кунад.Countstar Rigel як таҳлили зуд ва соддаро барои санҷиши интиқоли GFP ва инчунин қобилият пешниҳод мекунад.Ҳуҷайраҳо бо йодиди Propidium (PI) ва Hoechst 33342 барои муайян кардани шумораи ҳуҷайраҳои мурда ва шумораи умумии ҳуҷайраҳо ранг карда шуданд.Countstar Rigel як усули зуд ва миқдорӣ барои арзёбии самаранокии ифодаи GFP ва қобили ҳаётро пешниҳод мекунад.(Расми 4)
Тасвири 4: Ҳуҷайраҳо бо истифода аз Hoechst 33342 (кабуд) ҷойгир шудаанд ва фоизи ҳуҷайраҳои ифодакунандаи GFP (сабз) ба осонӣ муайян карда мешавад.Ҳуҷайраҳои ғайри қобили ҳаёт бо йодиди пропидиум (PI; сурх) ранг карда мешаванд.
Зиндагӣ ва шумораи ҳуҷайраҳо
AO/PI Ҳисобкунии дугонаи флуоресцентҳо як навъи таҳлилест, ки барои муайян кардани консентратсияи ҳуҷайраҳо, қобили ҳаёт истифода мешавад.Он аз рӯи намуди ҳуҷайраҳо ба ҳисобкунии хатҳои ҳуҷайра ва ҳисобкунии ибтидоии ҳуҷайраҳо тақсим карда мешавад.Маҳлул дорои омезиши доғи кислотаи нуклеини сабз-флуоресцентӣ, афлесуни акридин ва доғи сурхи нуклеинӣ, йодид пропидиум мебошад.Йодид пропидиум як ранги истисноии мембрана аст, ки танҳо ба ҳуҷайраҳои дорои мембранаҳои вайроншуда ворид мешавад, дар ҳоле ки афлесун акридин ба ҳама ҳуҷайраҳои популятсия ворид мешавад.Вақте ки ҳарду ранг дар ядро мавҷуданд, йодиди пропидиум боиси коҳиши флуорессенсияи афлесунии акридин тавассути интиқоли энергияи резонанси флуоресцентӣ (FRET) мегардад.Дар натиҷа, ҳуҷайраҳои ядроӣ бо мембранаҳои солим ба ранги сабзи флуоресцентӣ ранг мекунанд ва ҳамчун зинда ҳисобида мешаванд, дар ҳоле ки ҳуҷайраҳои ядроӣ бо мембранаҳои осебдида танҳо ранги флуоресцентиро ранг мекунанд ва ҳангоми истифодаи системаи Countstar Rigel мурда ҳисобида мешаванд.Маводи ядронашуда, аз қабили ҳуҷайраҳои сурх, тромбоцитҳо ва партовҳо флуорессия намекунанд ва аз ҷониби нармафзори Countstar Rigel нодида гирифта мешаванд.(Расми 5)
Тасвири 5: Countstar усули рангкунии дугона-флуоресцентиро барои муайян кардани оддӣ ва дақиқи консентратсияи PBMC ва қобили ҳаёт оптимизатсия кардааст.Намунаҳое, ки бо AO/PI ранг карда шудаанд, метавонанд бо Counstar Rigel таҳлил карда шаванд
