ความเข้มข้นของเซลล์ ความมีชีวิต และขนาดเซลล์และการวัดการรวมกลุ่ม

ตัวอย่างที่มีเซลล์ในสารแขวนลอยกำลังผสมกับสีย้อมสีน้ำเงินทริปแพน จากนั้นดึงเข้าไปใน Countstar Chamber Slide วิเคราะห์โดย Countstar Automated Cell Counterเครื่องมือของ Countstar ใช้เทคโนโลยีการถ่ายภาพด้วยแสงขั้นสูง เทคโนโลยีการจดจำภาพอัจฉริยะ และอัลกอริธึมซอฟต์แวร์อันทรงพลังซึ่งใช้หลักการนับเซลล์ทริแพนสีน้ำเงินแบบคลาสสิก ซึ่งไม่เพียงแต่ให้ความเข้มข้นและความมีชีวิตของเซลล์เท่านั้น แต่ยังให้ข้อมูลความเข้มข้นของเซลล์ ความมีชีวิต อัตราการรวมตัว ความกลม และการกระจายเส้นผ่านศูนย์กลางด้วยการวิ่งเพียงครั้งเดียว

การวิเคราะห์เซลล์รวม

รูปที่ 3 การนับเซลล์รวม

A. ภาพตัวอย่างเซลล์;
B. ภาพตัวอย่างเซลล์ที่มีเครื่องหมายระบุโดยซอฟต์แวร์ Countstar BioTech(วงกลมสีเขียว: เซลล์ที่มีชีวิต, วงกลมสีเหลือง: เซลล์ตาย, วงกลมสีแดง: เซลล์รวม)
C. ฮิสโตแกรมรวม

เซลล์ปฐมภูมิหรือเซลล์เพาะเลี้ยงย่อยบางเซลล์มีแนวโน้มที่จะรวมกลุ่มกันเมื่อวัฒนธรรมไม่ดีหรือการย่อยอาหารมากเกินไป ทำให้เกิดความยากลำบากอย่างมากในการนับเซลล์ด้วยฟังก์ชันการสอบเทียบการรวมตัว Countstar สามารถคำนวณการกระตุ้นของการรวมกลุ่มเพื่อให้แน่ใจว่าการนับเซลล์ที่ถูกต้องและได้รับอัตราการรวมและฮิสโทแกรมรวม จึงเป็นพื้นฐานสำหรับผู้ทดลองในการตัดสินสถานะของเซลล์

การตรวจสอบการเติบโตของเซลล์

รูปที่ 4 Cell Grow Curve

เส้นกราฟการเติบโตของเซลล์เป็นวิธีการทั่วไปในการวัดการเติบโตสัมบูรณ์ของจำนวนเซลล์ ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้สำคัญในการกำหนดความเข้มข้นของเซลล์และหนึ่งในพารามิเตอร์พื้นฐานสำหรับการเพาะเลี้ยงคุณสมบัติทางชีววิทยาพื้นฐานของเซลล์เพื่อให้สามารถอธิบายการเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกของจำนวนเซลล์ตลอดทั้งกระบวนการได้อย่างแม่นยำ เส้นกราฟการเติบโตโดยทั่วไปสามารถแบ่งออกเป็น 4 ส่วน ได้แก่ ระยะฟักตัวที่มีการเติบโตช้าระยะการเติบโตแบบทวีคูณที่มีความชันมาก ระยะที่ราบสูงและช่วงตกต่ำกราฟการเติบโตของเซลล์สามารถหาได้จากการพล็อตจำนวนเซลล์ที่มีชีวิต (10'000/มล.) เทียบกับเวลาเพาะเลี้ยง (h หรือ d)

การวัดความเข้มข้นและความมีชีวิตของเซลล์

รูปที่ 1 รูปภาพถูกจับโดย Countstar BioTech เนื่องจากเซลล์ (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 และ MDCK) ในระบบกันสะเทือนถูกย้อมด้วย Trypan Blue ตามลำดับ

Countstar ใช้ได้กับเซลล์ที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางระหว่าง 5-180um เช่น เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เซลล์แมลง และแพลงตอนบางชนิด

การวัดขนาดเซลล์

รูปที่ 2 การวัดขนาดเซลล์ของเซลล์ CHO ก่อนและหลังการถ่ายพลาสมิด

A. รูปภาพของเซลล์ CHO ที่แขวนลอยที่ย้อมด้วยทริปแพนสีน้ำเงินก่อนและหลังการถ่ายพลาสมิด
B. การเปรียบเทียบฮิสโทแกรมขนาดเซลล์ CHO ก่อนและหลังการถ่ายพลาสมิด

การเปลี่ยนแปลงขนาดเซลล์เป็นคุณลักษณะสำคัญและมักวัดในการวิจัยเซลล์โดยปกติจะมีการวัดค่าในการทดลองเหล่านี้: การถ่ายเซลล์ การทดสอบยา และการทดสอบการกระตุ้นเซลล์Countstar ให้ข้อมูลสัณฐานวิทยาทางสถิติ เช่น ขนาดของเซลล์ ภายใน 20 วินาที

ตัวนับเซลล์อัตโนมัติของ Countstar สามารถให้ข้อมูลทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ ซึ่งรวมถึงฮิสโตแกรมความเป็นวงกลมและเส้นผ่านศูนย์กลาง