เชิงนามธรรม: เซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคม์เป็นเซตย่อยของสเต็มเซลล์ที่มีพลูริโพเทนต์ที่สามารถแยกออกจากเซลล์มีโซเดิร์มได้ด้วยการต่ออายุการจำลองตัวเองและลักษณะการสร้างความแตกต่างหลายทิศทาง พวกมันมีศักยภาพสูงสำหรับการรักษาที่หลากหลายในการแพทย์เซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อหุ้มเซลล์มีฟีโนไทป์ภูมิคุ้มกันที่เป็นเอกลักษณ์และความสามารถในการควบคุมภูมิคุ้มกันดังนั้นเซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อหุ้มเซลล์จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิด วิศวกรรมเนื้อเยื่อ และการปลูกถ่ายอวัยวะนอกเหนือจากการใช้งานเหล่านี้แล้ว พวกมันยังถูกใช้เป็นเครื่องมือในอุดมคติในด้านวิศวกรรมเนื้อเยื่อในฐานะเซลล์เพาะเลี้ยงในชุดของการทดลองวิจัยพื้นฐานและการวิจัยทางคลินิกจนถึงปัจจุบันยังไม่มีวิธีการและมาตรฐานที่เป็นที่ยอมรับในการควบคุมคุณภาพของเซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อหุ้มเซลล์Countstar Rigel สามารถตรวจสอบความเข้มข้น ความมีชีวิต และลักษณะฟีโนไทป์ (และการเปลี่ยนแปลงของพวกมัน) ในระหว่างการผลิตและการสร้างความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดเหล่านี้นอกจากนี้ Countstar Rigel ยังมีข้อได้เปรียบในการรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับลักษณะทางสัณฐานวิทยา ซึ่งได้จากการบันทึกภาพโดยใช้ช่องสว่างถาวรและภาพเรืองแสงในระหว่างกระบวนการตรวจสอบคุณภาพเซลล์ทั้งหมดCountstar Rigel นำเสนอวิธีการที่รวดเร็ว ซับซ้อน และเชื่อถือได้สำหรับการควบคุมคุณภาพของสเต็มเซลล์
วัสดุและวิธีการ:
เซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อมีเซนไคม์ที่ได้จากไขมัน (AdMSC) มอบให้โดยศาสตราจารย์ Nianmin Qi สารละลายย้อม AO/PI (Shanghai RuiYu, CF002)แอนติบอดี: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (บริษัท BD)
AdMSC ถูกเพาะเลี้ยงในตู้อบความชื้น 37℃, 5% CO2ย่อยด้วยทริปซินก่อนใช้
ขั้นตอนการย้อมสีเครื่องหมายซีดีถูกปฏิบัติตามเป็นคู่มือของแอนติบอดี
การตรวจจับเครื่องหมายซีดีด้วย Countstar Rigel:
1. ขั้นตอนการสมัครสีสัญญาณถูกสร้างขึ้นโดยการตั้งค่าช่อง PE เป็นภาพ PE เรืองแสง
2. ยึดพื้นที่ 3 แห่งจากแต่ละห้อง
3. หลังจากการถ่ายภาพและการวิเคราะห์เบื้องต้นเสร็จสิ้นแล้ว การตั้งค่าธรณีประตู (ล็อกเกต) สำหรับการทรานส์เฟกบวกและลบถูกกำหนดโดยซอฟต์แวร์ FCS
การควบคุมคุณภาพของสเต็มเซลล์
รูปต่อไปนี้ (รูปที่ 1) แสดงขั้นตอนของ สเต็มเซลล์บำบัด .
รูปที่ 1: ขั้นตอนการบำบัดด้วยสเต็มเซลล์
ผลลัพธ์:
การกำหนดความเข้มข้น ความมีชีวิต เส้นผ่านศูนย์กลาง และการรวมตัวของ AdMSC
ความอยู่รอดของ AdMSC ถูกกำหนดโดย AO/PI ขั้นตอนการสมัครสองสีถูกสร้างขึ้นโดยการตั้งค่าช่องสีเขียวและช่องสีแดงเป็นภาพ AO และ PI เรืองแสง บวกกับฟิลด์ที่สว่างภาพตัวอย่างแสดงในรูปที่ 2
รูปที่ 2 รูปภาพก่อนการขนส่งและหลังการขนส่งของ AdMSCก. ก่อนการขนส่งมีการแสดงภาพตัวแทนB. หลังจากการขนส่ง;มีการแสดงภาพตัวแทน
ความอยู่รอดของ AdMSC เปลี่ยนแปลงอย่างมากหลังการขนส่งเมื่อเทียบกับก่อนการขนส่งความอยู่รอดก่อนการขนส่งคือ 92% แต่ลดลงเหลือ 71% หลังจากการขนส่งผลลัพธ์แสดงในรูปที่ 3
รูปที่ 3 ผลการดำรงชีวิตของ AdMSC (ก่อนการขนส่งและหลังการขนส่ง)
เส้นผ่านศูนย์กลางและการรวมตัวถูกกำหนดโดย Countstar Rigel ด้วยเส้นผ่านศูนย์กลางของ AdMSC เปลี่ยนไปอย่างมากหลังการขนส่งเมื่อเปรียบเทียบกับก่อนการขนส่งเส้นผ่านศูนย์กลางก่อนการขนส่งคือ 19µm แต่เพิ่มขึ้นเป็น 21µm หลังการขนส่งจำนวนรวมของก่อนการขนส่งคือ 20% แต่เพิ่มขึ้นเป็น 25% หลังการขนส่งจากภาพที่ถ่ายโดย Countstar Rigel ฟีโนไทป์ของ AdMSC เปลี่ยนไปอย่างมากหลังการขนส่งผลลัพธ์ถูกแสดงในรูปที่ 4
รูปที่ 4: ผลเส้นผ่านศูนย์กลางและการรวมตัวตอบ: รูปภาพตัวแทนของ AdMSC ฟีโนไทป์ของ AdMSC มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมากหลังการขนส่งB: จำนวนรวมก่อนการขนส่งคือ 20% แต่เพิ่มขึ้นเป็น 25% หลังการขนส่งC: เส้นผ่านศูนย์กลางก่อนการขนส่งคือ 19µm แต่เพิ่มขึ้นเป็น 21µm หลังการขนส่ง
กำหนดอิมมูโนฟีโนไทป์ของ AdMSC โดย Countstar Rigel
อิมมูโนฟีโนไทป์ของ AdMSC ถูกกำหนดหาโดย Countstar Rigel, AdMSC ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีที่ต่างกันตามลำดับ (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR)ขั้นตอนการสมัครสีสัญญาณถูกสร้างขึ้นโดยการตั้งค่าช่องสีเขียวเป็นภาพเรืองแสง PE บวกช่องสว่างการแบ่งส่วนอ้างอิงของรูปภาพฟิลด์สว่างถูกใช้เป็นมาสก์เพื่อสุ่มตัวอย่างสัญญาณเรืองแสง PEผลลัพธ์ของ CD105 ถูกแสดงไว้ (รูปที่ 5)
รูปที่ 5: ผลลัพธ์ CD105 ของ AdMSC ถูกกำหนดโดย Countstar Rigelตอบ: การวิเคราะห์เชิงปริมาณของเปอร์เซ็นต์บวกของ CD105 ในตัวอย่างต่างๆ โดยซอฟต์แวร์ FCS express 5 plusB: รูปภาพคุณภาพสูงให้ข้อมูลลักษณะทางสัณฐานวิทยาเพิ่มเติมC: ตรวจสอบผลลัพธ์ด้วยภาพขนาดย่อของทุกเซลล์ เครื่องมือซอฟต์แวร์ FCS แบ่งเซลล์ออกเป็นกลุ่มต่างๆ ตามการแสดงออกของโปรตีนที่แตกต่างกัน
ผลลัพธ์ของแอนติบอดีอื่นๆ ถูกแสดงไว้ในรูปที่ 6
รูปที่ 6: A: ภาพตัวแทนของ ASCs ที่มีสัณฐานวิทยารูปแกนหมุนทั่วไปถ่ายโดยกล้องจุลทรรศน์ OLYMPUSกำลังขยายดั้งเดิม (10x)B: ความแตกต่างของ Adipogenic ของ ASCs นั้นพิสูจน์ได้จากการย้อม Ruthenium Red ซึ่งแสดงพื้นที่ของการทำให้เป็นแร่ถ่ายโดยกล้องจุลทรรศน์ OLYMPUSกำลังขยายดั้งเดิม (10x)C: การกำหนดลักษณะ Countstar FL ของ ASC
สรุป:
Countstar FL สามารถตรวจสอบความเข้มข้น ความมีชีวิต และลักษณะฟีโนไทป์ (และการเปลี่ยนแปลงของพวกมัน) ในระหว่างการผลิตและการสร้างความแตกต่างของเซลล์ต้นกำเนิดเหล่านี้FCS express มีฟังก์ชันในการตรวจสอบทุกเซลล์สัญญาณ ตรวจสอบข้อมูลผ่านภาพผู้ใช้ยังสามารถมีความมั่นใจที่จะดำเนินการทดลองต่อไปตามผลลัพธ์ของ Countstar RigelCountstar Rigel นำเสนอวิธีการที่รวดเร็ว ซับซ้อน และเชื่อถือได้สำหรับการควบคุมคุณภาพของสเต็มเซลล์
