Pinagsasama ng Countstar system ang image cytometer at cell counter sa isang solong bench-top na instrumento.Ang application-driven, compact, at automated na cell imaging system ay nagbibigay ng all-in-one na solusyon para sa cancer cell research, kabilang ang cell counting, viability (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), cell cycle (PI), at paglipat ng GFP/RFP.
Abstract
Ang kanser ay isa sa mga pangunahing sanhi ng kamatayan sa buong mundo, at ang pagbuo ng mga bagong paraan ng paggamot sa kanser ay may malaking kahalagahan.Ang selula ng kanser ay ang pangunahing layunin ng pananaliksik ng kanser, ang iba't ibang impormasyon ay kailangang suriin mula sa selula ng kanser.Ang lugar ng pananaliksik na ito ay nangangailangan ng mabilis, maaasahan, simple at detalyadong pagsusuri ng cell.Ang sistema ng Countstar ay nagbibigay ng isang simpleng platform ng solusyon para sa pagsusuri ng selula ng kanser.
Pag-aralan ang Cancer Cell Apoptosis ni Countstar Rigel
Ang mga pagsusuri sa apoptosis ay karaniwang ginagamit sa maraming mga laboratoryo para sa iba't ibang layunin mula sa pagtatasa sa kalusugan ng mga kultura ng cell hanggang sa pagsusuri sa toxicity ng isang panel ng mga compound.
Ang apoptosis assay ay isang uri na ginagamit para sa pagtukoy ng porsyento ng apoptosis ng mga cell sa pamamagitan ng Annexin V-FITC/PI staining method.Ang Annexin V ay nagbubuklod sa phosphatidylserine (PS) na may maagang apoptosis cell o necrosis cell.Ang PI ay pumapasok lamang sa mga necrotic/napaka-late-stage na apoptotic na mga cell.(Larawan 1)
A： Maagang apoptosis Annexin V (+), PI (-)
B：Late apoptosis Annexin V (+), PI (+)
Figure1: Pinalaki ang mga detalye ng mga larawan ng Countstar Rigel (5 x magnification) ng 293 na mga cell, ginagamot sa Annexin V FITC at PI
Pagsusuri ng Cell Cycle ng Cancer Cell
Ang cell cycle o cell-division cycle ay ang serye ng mga kaganapan na nagaganap sa isang cell na humahantong sa paghahati nito at pagdoble ng DNA nito (DNA replication) upang makabuo ng dalawang anak na selula.Sa mga cell na may nucleus, tulad ng sa mga eukaryotes, ang cell cycle ay nahahati din sa tatlong yugto: interphase, mitotic (M) phase, at cytokinesis.Ang propidium iodide (PI) ay isang nuclear staining dye na kadalasang ginagamit upang sukatin ang cell cycle.Dahil ang dye ay hindi makapasok sa mga live na cell, ang mga cell ay naayos na may ethanol bago ang paglamlam.Ang lahat ng mga cell ay pagkatapos ay mabahiran.Ang mga selulang naghahanda para sa paghahati ay maglalaman ng dumaraming DNA at magpapakita ng proporsyonal na pagtaas ng fluorescence.Ang mga pagkakaiba sa intensity ng fluorescence ay ginagamit upang matukoy ang porsyento ng mga cell sa bawat yugto ng cell cycle.Maaaring makuha ng Countstar ang imahe at ang mga resulta ay ipapakita sa FCS express software.(Figure 2)
Figure 2: Ang MCF-7 (A) at 293T (B) ay nabahiran ng cell cycle Detection Kit na may PI, ang mga resulta ay tinutukoy ng Countstar Rigel, at sinuri ng FCS express.
Viability at GFP Transfection Determination sa Cell
Sa panahon ng bioprocess, ang GFP ay kadalasang ginagamit upang mag-fuse sa recombinant na protina bilang indicator.Tukuyin ang GFP fluorescent ay maaaring sumasalamin sa target na expression ng protina.Nag-aalok ang Countstar Rigel ng mabilis at simpleng assay para sa pagsubok sa paglipat ng GFP pati na rin sa posibilidad na mabuhay.Ang mga cell ay nabahiran ng Propidium iodide (PI) at Hoechst 33342 upang tukuyin ang patay na populasyon ng cell at kabuuang populasyon ng cell.Nag-aalok ang Countstar Rigel ng mabilis at dami ng paraan para sa pagsusuri ng kahusayan at kakayahang mabuhay ng GFP sa parehong oras.(Larawan 4)
Figure 4: Ang mga cell ay matatagpuan gamit ang Hoechst 33342 (asul) at ang porsyento ng GFP na nagpapahayag ng mga cell (berde) ay madaling matukoy.Ang nonviable cell ay nabahiran ng propidium iodide (PI; pula).
Viability at Bilang ng Cell
Ang AO/PI Dual-fluoresces counting ay ang uri ng assay na ginagamit para sa pag-detect ng cell concentration, viability.Nahahati ito sa cell line counting at primary cell counting ayon sa iba't ibang uri ng cell.Ang solusyon ay naglalaman ng kumbinasyon ng green-fluorescent nucleic acid stain, acridine orange, at ang redfluorescent nucleic acid stain, propidium iodide.Ang propidium iodide ay isang membrane exclusion dye na pumapasok lamang sa mga cell na may mga nakompromisong lamad habang ang acridine orange ay tumatagos sa lahat ng mga cell sa isang populasyon.Kapag ang parehong mga tina ay naroroon sa nucleus, ang propidium iodide ay nagdudulot ng pagbawas sa acridine orange fluorescence sa pamamagitan ng fluorescence resonance energy transfer (FRET).Bilang resulta, ang mga nucleated na cell na may buo na lamad ay nabahiran ng fluorescent na berde at binibilang bilang live, samantalang ang mga nucleated na cell na may mga nakompromisong lamad ay nagpapalamlam lamang ng fluorescent na pula at binibilang na patay kapag ginagamit ang Countstar Rigel system.Ang non-nucleated na materyal gaya ng mga red blood cell, platelet at debris ay hindi nag-fluoresce at hindi pinapansin ng Countstar Rigel software.(Larawan 5)
Figure 5: Ang Countstar ay nag-optimize ng isang dual-fluorescence staining na paraan para sa simple, tumpak na pagtukoy ng konsentrasyon at posibilidad ng PBMC.Maaaring masuri ang mga sample na nabahiran ng AO/PI gamit ang Counstar Rigel
