Ang pagsusuri sa mga leukocytes sa buong dugo ay isang nakagawiang pagsusuri sa clinical lab o blood bank.Ang konsentrasyon at posibilidad na mabuhay ng mga leukocytes ay ang mahalagang index bilang kontrol sa kalidad ng pag-iimbak ng dugo.Bukod sa leukocyte, ang buong dugo ay naglalaman ng malaking bilang ng mga platelet, pulang selula ng dugo, o cellular debris, na ginagawang imposibleng suriin ang buong dugo nang direkta sa ilalim ng mikroskopyo o maliwanag na field cell counter.Ang mga tradisyonal na pamamaraan sa pagbibilang ng mga puting selula ng dugo ay nagsasangkot ng proseso ng lysis ng RBC, na tumatagal ng oras.
Ang AOPI Dual-fluoresces counting ay ang uri ng assay na ginagamit para sa pag-detect ng cell concentration at viability.Ang solusyon ay kumbinasyon ng acridine orange (ang green-fluorescent nucleic acid stain) at propidium iodide (ang red-fluorescent nucleic acid stain).Ang propidium iodide (PI) ay isang membrane exclusion dye na pumapasok lamang sa mga cell na may mga nakompromisong lamad, habang ang acridine orange ay kayang tumagos sa lahat ng mga cell sa isang populasyon.Kapag ang parehong mga tina ay naroroon sa nucleus, ang propidium iodide ay nagdudulot ng pagbawas sa acridine orange fluorescence sa pamamagitan ng fluorescence resonance energy transfer (FRET).Bilang resulta, ang mga nucleated na cell na may buo na lamad ay nabahiran ng fluorescent green at binibilang bilang live, samantalang ang mga nucleated na cell na may mga nakompromisong lamad ay nagpapalamlam lamang ng fluorescent na pula at binibilang na patay kapag ginagamit ang Countstar® Rigel system.
Ang Countstar Rigel ay isang mainam na solusyon para sa maraming kumplikadong mga pagsusuri sa characterization ng populasyon ng cell, na nagbibigay-daan upang mabilis na masuri ang mga white-blood-cell sa buong dugo.
Eksperimental na Pamamaraan:
1. Kumuha ng 20 µl ng sample ng dugo at palabnawin ang sample sa 180 µl ng PBS.
2. Magdagdag ng 12µl AO/PI solution sa 12µl sample, dahan-dahang hinaluan ng pipette;
3. Gumuhit ng 20µl mixture sa chamber slide;
4. Payagan ang mga cell na manirahan sa silid sa loob ng 1 minuto;
5. Insekto ang slide sa instrumento ng Countstar FL;
6. Piliin ang "AO/PI Viability" assay, pagkatapos ay Ipasok ang Sample ID para sa sample na ito.
7. Piliin ang Dilution ratio, Cell Type, ang pag-click sa 'Run' para simulan ang pagsubok.
Babala: Ang AO at PI ay isang potensyal na carcinogen.Inirerekomenda na ang operator ay magsuot ng personal protective equipment (PPE) upang maiwasan ang direktang pagkakadikit sa balat at mata.
Resulta:
1. Bright Field Imahe ng buong dugo
Sa maliwanag na field na imahe ng buong dugo, ang WBC ay hindi nakikita sa mga pulang selula ng dugo.(Larawan 1)
Figure 1 Maliwanag na field na imahe ng buong dugo.
2. Fluorescence Larawan ng buong dugo
Ang AO at PI dye ay parehong mantsa ng DNA sa cell nucleus ng mga cell.Samakatuwid, ang mga platelet, pulang selula ng dugo, o cellular debris ay hindi makakaapekto sa konsentrasyon ng mga leukocyte at resulta ng kakayahang mabuhay.Ang mga live na leukocyte (Berde) at mga patay na leukocyte (Pula) ay madaling makita sa mga larawan ng fluorescence.(Figure 2)
Figure 2 Fluorescence Mga imahe ng buong dugo.(A).Larawan ng AO Channel;(B) Larawan ng PI Channel;(C) Pagsamahin ang mga larawan ng AO at PI Channel.
3. Konsentrasyon at posibilidad na mabuhay ng mga leukocytes
Awtomatikong binibilang ng Countstar FL software ang mga cell ng tatlong seksyon ng chamber at kinakalkula ang average na halaga ng kabuuang bilang ng WBC cell (1202), konsentrasyon (1.83 x 106 cells/ml), at % viability (82.04%).Ang buong dugo na mga imahe at data ay madaling ma-export bilang PDF, Image o Excel para sa karagdagang pagsusuri o pag-archive ng data.
Larawan 3 Screenshot ng Countstar Rigel Software
