Ang AOPI Dual-fluoresces counting ay ang uri ng assay na ginagamit para sa pag-detect ng cell concentration at viability.Ang solusyon ay isang kumbinasyon ng acridine orange (ang green-fluorescent nucleic acid stain) at propidium iodide (ang red-fluorescent nucleic acid stain).Ang propidium iodide (PI) ay isang membrane exclusion dye na pumapasok lamang sa mga cell na may mga nakompromisong lamad, habang ang acridine orange ay kayang tumagos sa lahat ng mga cell sa isang populasyon.Kapag ang parehong mga tina ay naroroon sa nucleus, ang propidium iodide ay nagdudulot ng pagbawas sa acridine orange fluorescence sa pamamagitan ng fluorescence resonance energy transfer (FRET).Bilang resulta, ang mga nucleated na cell na may buo na lamad ay nabahiran ng fluorescent na berde at binibilang bilang live, samantalang ang mga nucleated na cell na may mga nakompromisong lamad ay nagpapalamlam lamang ng fluorescent na pula at binibilang na patay kapag ginagamit ang Countstar® FL system.Ang non-nucleated na materyal gaya ng mga red blood cell, platelet at debris ay hindi nag-fluoresce at hindi pinapansin ng Countstar® FL software.
Proseso ng Stem Cell Therapy
Figure 4 Pagsubaybay sa viability at cell count ng mesenchymal stem cells (MSCs) para sa paggamit sa mga cell therapy.
Tukuyin ang posibilidad ng MSC sa pamamagitan ng AO/PI at Trypan Blue assay
Larawan 2. A. Larawan ng MSC na nabahiran ng AO/PI at Trypan Blue;2. Paghahambing ng AO/PI at Trypan blue na resulta bago at pagkatapos ng transportasyon.
Ang cell refractive index ay nagbabago, ang paglamlam ng Trypan Blue ay hindi gaanong halata, mahirap matukoy ang posibilidad na mabuhay pagkatapos ng transportasyon.Habang ang dual-color fluorescence ay nagbibigay-daan para sa paglamlam ng mga buhay at patay na nucleated na mga cell, ang pagbuo ng tumpak na mga resulta ng viability kahit na sa pagkakaroon ng mga debris, platelet, at pulang selula ng dugo.
