Pang-eksperimentong Protocol
Ang cytotoxicity% ay kinakalkula ng equation sa ibaba.
Cytotoxicity % = (Live counts of control – Live counts of treated) / Live counts of control × 100
Sa pamamagitan ng pag-label sa mga target na tumor cells na may non-toxic, non-radioactive calcein AM o transfect gamit ang GFP, masusubaybayan natin ang pagpatay sa mga tumor cells ng CAR-T cells.Habang ang mga live na target na selula ng kanser ay lalagyan ng label ng berdeng calcein AM o GFP, hindi mapapanatili ng mga patay na selula ang berdeng tina.Ang Hoechst 33342 ay ginagamit para mantsang ang lahat ng mga cell (parehong T cells at tumor cells), bilang kahalili, ang mga target na tumor cells ay maaaring mantsang may lamad na nakagapos na calcein AM, PI ay ginagamit para mantsang ang mga patay na selula (parehong T cells at tumor cells).Ang diskarte sa paglamlam na ito ay nagbibigay-daan para sa diskriminasyon ng iba't ibang mga cell.
E: T Ratio dependent Cytotoxicity ng K562
Ang halimbawa ng Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescent na mga imahe ay ang K562 target na mga cell sa t = 3 oras
Ang mga nagresultang fluorescent na imahe ay nagpakita ng pagtaas sa Hoechst+CFSE+PI+ Target na mga cell habang tumaas ang ratio ng E: T
