Countstar sistemi, görüntü sitometresini ve hücre sayacını tek bir tezgah üstü cihazda birleştirir.Bu uygulama odaklı, kompakt ve otomatik hücre görüntüleme sistemi, hücre sayımı, canlılık (AO/PI, tripan mavisi), apoptoz (Annexin V-FITC/PI), hücre dahil olmak üzere kanser hücresi araştırmaları için hepsi bir arada bir çözüm sunar. döngüsü (PI) ve GFP/RFP transfeksiyonu.
Soyut
Kanser, dünya çapında başlıca ölüm nedenlerinden biridir ve yeni kanser tedavi yöntemlerinin geliştirilmesi büyük önem taşımaktadır.Kanser hücresi kanserin temel araştırma nesnesidir, kanser hücresinden çeşitli bilgilerin değerlendirilmesi gerekir.Bu araştırma alanı hızlı, güvenilir, basit ve detaylı hücre analizine ihtiyaç duyar.Countstar sistemi, kanser hücresi analizi için basit bir çözüm platformu sağlar.
Countstar Rigel'den Kanser Hücresi Apoptozu Çalışması
Apoptoz tahlilleri, hücre kültürlerinin sağlığının değerlendirilmesinden bir bileşikler panelinin toksisitesinin değerlendirilmesine kadar çeşitli amaçlar için birçok laboratuvarda rutin olarak kullanılmaktadır.
Apoptoz tahlili, Annexin V-FITC/PI boyama yöntemi ile hücrelerin apoptoz yüzdesini belirlemek için kullanılan bir tiptir.Anneksin V, erken apoptoz hücresi veya nekroz hücresi ile fosfatidilserine (PS) bağlanır.PI sadece nekrotik/çok geç evre apoptotik hücrelere girer.(Şekil 1)
A： Erken apoptoz Annexin V (+), PI (-)
B: Geç apoptoz Annexin V (+), PI (+)
Şekil 1: Annexin V FITC ve PI ile işlenmiş 293 hücrenin Countstar Rigel resimlerinin (5 x büyütme) büyütülmüş ayrıntıları
Kanser Hücresinin Hücre Döngüsü Analizi
Hücre döngüsü veya hücre bölünme döngüsü, bir hücrede meydana gelen ve iki yavru hücre üretmek için DNA'sının bölünmesine ve çoğaltılmasına (DNA replikasyonu) yol açan olaylar dizisidir.Çekirdeği olan hücrelerde, ökaryotlarda olduğu gibi hücre döngüsü de üç döneme ayrılır: interfaz, mitotik (M) faz ve sitokinez.Propidium iyodür (PI), hücre döngüsünü ölçmek için sıklıkla kullanılan bir nükleer boyama boyasıdır.Boya canlı hücrelere giremediğinden hücreler boyamadan önce etanol ile sabitlenir.Daha sonra tüm hücreler boyanır.Bölünmeye hazırlanan hücreler, artan miktarlarda DNA içerecek ve orantılı olarak artan floresan gösterecektir.Floresan yoğunluğundaki farklılıklar, hücre döngüsünün her fazındaki hücrelerin yüzdesini belirlemek için kullanılır.Countstar görüntüyü yakalayabilir ve sonuçlar FCS ekspres yazılımında görüntülenecektir.(Şekil 2)
Şekil 2: MCF-7 (A) ve 293T (B), PI ile hücre döngüsü Tespit Kiti ile boyandı, sonuçlar Countstar Rigel tarafından belirlendi ve FCS ekspres ile analiz edildi.
Hücrede Canlılık ve GFP Transfeksiyon Tayini
Biyoproses sırasında, GFP genellikle bir gösterge olarak rekombinant protein ile kaynaşmak için kullanılır.GFP floresanının hedef protein ekspresyonunu yansıtabileceğini belirleyin.Countstar Rigel, GFP transfeksiyonunun yanı sıra canlılığı test etmek için hızlı ve basit bir tahlil sunar.Hücreler, ölü hücre popülasyonunu ve toplam hücre popülasyonunu tanımlamak için Propidium iodide (PI) ve Hoechst 33342 ile boyandı.Countstar Rigel, GFP ekspresyonunun verimliliğini ve canlılığını aynı anda değerlendirmek için hızlı, nicel bir yöntem sunar.(Şekil 4)
Şekil 4: Hücreler Hoechst 33342 (mavi) kullanılarak yerleştirilmiştir ve GFP ifade eden hücrelerin (yeşil) yüzdesi kolaylıkla belirlenebilir.Canlı olmayan hücre, propidium iyodür (PI; kırmızı) ile boyanmıştır.
Canlılık ve Hücre Sayısı
AO/PI Çift floresan sayımı, hücre konsantrasyonunun, canlılığının saptanması için kullanılan tahlil tipidir.Farklı hücre tipine göre hücre hattı sayımı ve birincil hücre sayımına ayrılmıştır.Çözelti, yeşil floresan nükleik asit boyası, akridin portakalı ve kırmızı floresan nükleik asit boyası, propidyum iyodür kombinasyonunu içerir.Propidium iyodür, akridin portakalı bir popülasyondaki tüm hücrelere nüfuz ederken, yalnızca zarları bozulmuş hücrelere giren bir zar dışlama boyasıdır.Çekirdekte her iki boya da bulunduğunda, propidyum iyodür, flüoresans rezonans enerji transferi (FRET) ile akridin turuncu flüoresansında bir azalmaya neden olur.Sonuç olarak, zarları bozulmamış çekirdekli hücreler floresan yeşili boyar ve canlı olarak sayılırken, zarları bozulmuş çekirdekli hücreler yalnızca floresan kırmızısını boyar ve Countstar Rigel sistemini kullanırken ölü olarak sayılır.Kırmızı kan hücreleri, trombositler ve kalıntılar gibi çekirdeksiz materyaller floresan yaymaz ve Countstar Rigel yazılımı tarafından göz ardı edilir.(Şekil 5)
Şekil 5: Countstar, PBMC konsantrasyonunun ve canlılığının basit, doğru bir şekilde belirlenmesi için bir çift floresan boyama yöntemini optimize etti.AO/PI ile boyanmış numuneler Counstar Rigel ile analiz edilebilir
