Soyut: Mezenkimal kök hücreler, mezodermden izole edilebilen pluripotent kök hücrelerin bir alt kümesidir.Kendini kopyalama yenilenmesi ve çok yönlü farklılaşma özellikleri ile tıpta çeşitli terapiler için yüksek bir potansiyele sahiptirler.Mezenkimal kök hücreler, benzersiz bir bağışıklık fenotipine ve bağışıklık düzenleme yeteneğine sahiptir.Bu nedenle mezenkimal kök hücreler, kök hücre transplantasyonlarında, doku mühendisliğinde ve organ transplantasyonunda yaygın olarak kullanılmaktadır.Ve bu uygulamaların ötesinde, bir dizi temel ve klinik araştırma deneyinde tohumlama hücreleri olarak doku mühendisliğinde ideal bir araç olarak kullanılırlar.Şimdiye kadar mezenkimal kök hücrelerin kalite kontrolü için yaygın olarak kabul edilen bir yöntem ve standart bulunmamaktadır.Countstar Rigel, bu kök hücrelerin üretimi ve farklılaşması sırasında konsantrasyonu, canlılığı ve fenotip özelliklerini (ve değişikliklerini) izleyebilir.Countstar Rigel, tüm hücre kalitesi izleme süreci boyunca kalıcı parlak alan ve floresan bazlı görüntü kayıtları tarafından sağlanan ek morfolojik bilgileri elde etme avantajına da sahiptir.Countstar Rigel, kök hücrelerin kalite kontrolü için hızlı, sofistike ve güvenilir bir yöntem sunar.
Malzemeler ve yöntemler:
Adipozdan türetilen mezenkimal kök hücreler (AdMSC'ler), Profesör Nianmin Qi, AO/PI boyama solüsyonu (Shanghai RuiYu, CF002) tarafından hediye edildi.Antikor: CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLADR (BD Şirketi).
AdMSC'ler 37℃, %5 CO2 ile nemlendirilmiş bir inkübatörde kültürlendi.Kullanmadan önce tripsin ile sindirin.
Antikor el kitabı olarak CD marker boyama prosedürü izlendi.
Countstar Rigel ile CD işaretleyici algılama:
1. PE kanalını görüntü PE floresanına ayarlayarak bir sinyal rengi uygulama prosedürü oluşturulmuştur.
2. Her odadan 3 alan alındı.
3. Görüntüleme ve ilk analiz tamamlandıktan sonra, pozitif ve negatif transfeksiyon için eşik (günlük kapısı) ayarı FCS yazılımı tarafından belirlendi.
Kök hücrenin kalite kontrolü
Aşağıdaki Şekil (Şekil 1) aşağıdaki prosedürü göstermektedir: Kök hücre tedavisi .
Şekil 1: Kök hücre tedavisi prosedürü
Sonuçlar:
AdMSC'lerin konsantrasyonunun, canlılığının, çapının ve kümelenmesinin belirlenmesi.
AdMSC'lerin yaşayabilirliği AO/PI tarafından belirlendi, Yeşil kanal ve Kırmızı kanal görüntü AO ve PI floresansına ek olarak parlak bir alana ayarlanarak çift renkli bir uygulama prosedürü oluşturuldu.Örnek görüntüler Şekil 2'de gösterildi.
Şekil 2. AdMSC'lerin nakliye öncesi ve nakliyesinden sonraki görüntüleri.A. Taşımadan önce;temsili bir resim gösterilir.B. Taşımadan sonra;temsili bir resim gösterilir.
AdMSC'lerin uygulanabilirliği, nakliye öncesine kıyasla nakliyeden sonra büyük ölçüde değişti.Taşımadan önce canlılık %92 iken, taşıma sonrasında %71'e düşmüştür.Sonuç Şekil 3'te gösterildi.
Şekil 3. AdMSC'lerin canlılık sonuçları (Nakliye öncesi ve nakliye sonrası)
Çap ve agregasyon ayrıca Countstar Rigel tarafından belirlendi.AdMSC'lerin çapı, nakliye öncesine kıyasla nakliyeden sonra büyük ölçüde değişti.Nakil öncesi çap 19µm iken nakliyeden sonra 21µm'ye yükseldi.Taşıma öncesi yığılma %20 iken, taşıma sonrasında %25'e çıkmıştır.Countstar Rigel tarafından çekilen görüntülerden, AdMSC'lerin fenotipi, taşımadan sonra büyük ölçüde değişti.Sonuçlar Şekil 4'te gösterildi.
Şekil 4: Çap ve toplama sonuçları.C: AdMSC'lerin temsili görüntüleri, AdMSC'lerin fenotipi, nakliyeden sonra büyük ölçüde değişti.B: Taşıma öncesi yığılma %20 iken, taşıma sonrasında %25'e yükseldi.C: Nakil öncesi çap 19µm iken nakliyeden sonra 21µm'ye yükseldi.
Countstar Rigel tarafından AdMSC'lerin immünofenotipini belirleyin
AdMSC'lerin immünofenotipi Countstar Rigel tarafından belirlendi, AdMSC'ler sırasıyla farklı antikorlarla (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105, HLA-DR) inkübe edildi.Görüntü PE floresansına bir Yeşil kanal artı bir parlak alan ayarlanarak bir sinyal rengi uygulama prosedürü oluşturuldu.PE floresan sinyalini örneklemek için bir maske olarak parlak alan resmi referans bölütlemesi uygulandı.CD105'in sonuçları gösterildi (Şekil 5).
Şekil 5: AdMSC'lerin CD105 sonuçları Countstar Rigel tarafından belirlendi.A: FCS express 5 plus yazılımı ile farklı örneklerde CD105 pozitif yüzdesinin kantitatif analizi.B: Yüksek kaliteli görüntüler ek morfolojik bilgiler sağlar.C: Her bir hücrenin küçük resimleriyle doğrulanmış sonuçlar, FCS yazılım araçları, hücreleri değişen protein ifadelerine göre farklı gruplara ayırdı.
Diğer antikor sonuçları Şekil 6'da gösterilmiştir.
Şekil 6: A: Tipik iğ şeklindeki morfolojiye sahip ASC'lerin temsili bir görüntüsü.OLYMPUS mikroskobu tarafından yakalanmıştır.Orijinal büyütme, (10x).B: ASC'lerin adipojenik farklılaşması, mineralizasyon alanlarını gösteren Rutenyum Kırmızısı boyama ile kanıtlanmıştır.OLYMPUS mikroskobu tarafından yakalanmıştır.Orijinal büyütme (10x).C: ASC'lerin Countstar FL karakterizasyonu.
Özet:
Countstar FL, bu kök hücrelerin üretimi ve farklılaşması sırasında konsantrasyonu, canlılığı ve fenotip özelliklerini (ve değişikliklerini) izleyebilir.FCS express, her sinyal hücresini gözden geçirme, görüntü aracılığıyla verileri doğrulama işlevi sağlar.Kullanıcı ayrıca Countstar Rigel sonuçlarına dayalı olarak sonraki deneyleri gerçekleştirme güvenine sahip olabilir.Countstar Rigel, kök hücrelerin kalite kontrolü için hızlı, sofistike ve güvenilir bir yöntem sunar.
