AOPI Çift floresan sayımı, hücre konsantrasyonunu ve canlılığını saptamak için kullanılan tahlil tipidir.Çözelti, akridin portakalı (yeşil-floresan nükleik asit boyası) ve propidium iyodür (kırmızı-floresan nükleik asit boyası) kombinasyonudur.Propidium iyodür (PI), akridin portakalı bir popülasyondaki tüm hücrelere nüfuz edebilirken, yalnızca zarları bozulmuş hücrelere giren bir zar dışlama boyasıdır.Çekirdekte her iki boya da bulunduğunda, propidyum iyodür, flüoresans rezonans enerji transferi (FRET) ile akridin turuncu flüoresansında bir azalmaya neden olur.Sonuç olarak, zarları bozulmamış çekirdekli hücreler floresan yeşili boyar ve canlı olarak sayılırken, zarları bozulmuş çekirdekli hücreler yalnızca floresan kırmızısı boyar ve Countstar® FL sistemini kullanırken ölü olarak sayılır.Kırmızı kan hücreleri, trombositler ve kalıntılar gibi çekirdeksiz materyaller floresan yaymaz ve Countstar® FL yazılımı tarafından göz ardı edilir.
Kök Hücre Tedavisi Süreci
Şekil 4 Hücre tedavilerinde kullanım için mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) canlılığının ve hücre sayısının izlenmesi.
AO/PI ve Trypan Blue testi ile MSC canlılığını belirleyin
Şekil 2. A. AO/PI ve Trypan Blue ile boyanmış MSC görüntüsü;2. Nakil öncesi ve sonrası AO/PI ve Tripan mavisi sonucunun karşılaştırılması.
Hücre kırılma indeksi değişir, Trypan Blue boyaması o kadar belirgin değildi, nakilden sonra canlılığını belirlemek zor.Çift renkli floresan canlı ve ölü çekirdekli hücrelerin boyanmasına izin verirken, enkaz, trombosit ve kırmızı kan hücrelerinin varlığında bile doğru canlılık sonuçları üretir.
