Deney protokolü
Sitotoksisite %'si aşağıdaki denklem ile hesaplanır.
Sitotoksisite % = (Canlı kontrol sayısı – Tedavi edilen canlı sayısı) / Canlı kontrol sayısı × 100
Hedef tümör hücrelerini toksik olmayan, radyoaktif olmayan kalsein AM ile etiketleyerek veya GFP ile transfekte ederek, tümör hücrelerinin CAR-T hücreleri tarafından öldürülmesini izleyebiliyoruz.Canlı hedef kanser hücreleri yeşil kalsein AM veya GFP ile etiketlenirken, ölü hücreler yeşil boyayı tutamaz.Hoechst 33342 tüm hücreleri (hem T hücreleri hem de tümör hücreleri) boyamak için kullanılır, alternatif olarak hedef tümör hücreleri membrana bağlı kalsein AM ile boyanabilir, PI ölü hücreleri (hem T hücreleri hem de tümör hücreleri) boyamak için kullanılır.Bu boyama stratejisi, farklı hücrelerin ayırt edilmesini sağlar.
E: K562'nin T Oranına bağlı Sitotoksisitesi
Örnek Hoechst 33342, CFSE, PI floresan görüntüleri, t = 3 saatte K562 hedef hücreleridir.
Elde edilen floresan görüntüler, E:T oranı arttıkça Hoechst+CFSE+PI+ Hedef hücrelerinde artış gösterdi.
