Підрахунок AOPI з подвійною флуоресценцією є типом аналізу, який використовується для визначення концентрації та життєздатності клітин.Розчин являє собою комбінацію акридинового оранжевого (зелена флуоресцентна фарба нуклеїнової кислоти) і йодиду пропідію (червона флуоресцентна фарба нуклеїнової кислоти).Йодид пропідію (PI) є барвником для виключення мембрани, який проникає лише в клітини з пошкодженими мембранами, тоді як акридиновий помаранчевий здатний проникати в усі клітини популяції.Коли в ядрі присутні обидва барвники, йодид пропідію викликає зниження флуоресценції акридинового оранжевого кольору за рахунок флуоресцентного резонансного переносу енергії (FRET).В результаті клітини з ядрою з інтактними мембранами фарбуються флуоресцентним зеленим кольором і вважаються живими, тоді як клітини з ядрою з пошкодженими мембранами фарбуються лише у флуоресцентний червоний колір і вважаються мертвими при використанні системи Countstar® FL.Безядерний матеріал, такий як еритроцити, тромбоцити та уламки, не флуоресцує і ігнорується програмним забезпеченням Countstar® FL.
Процес терапії стовбуровими клітинами
Рисунок 4 Моніторинг життєздатності та кількості клітин мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) для використання в клітинній терапії.
Визначте життєздатність МСК за допомогою аналізу AO/PI та трипанового синього
Малюнок 2. А. Зображення МСК, забарвленого AO/PI та трипановим синім;2. Порівняння результату AO/PI та трипанового синього до та після транспортування.
Змінюється показник заломлення клітин, фарбування трипановим синім не було таким очевидним, важко визначити життєздатність після транспортування.Хоча двоколірна флуоресценція дозволяє фарбувати живі та мертві клітини з ядрами, генеруючи точні результати життєздатності навіть у присутності сміття, тромбоцитів та еритроцитів.
